抑制am基因对巢癌细胞生长和化疗敏感性的影响.pdfVIP

『iIlll r rl l l l l l rllr rl IIJ ＼1892410 目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………．1 英文论著摘要……………………………………………………………………·4 二、英文缩略语………………………………………………………………………·7 三、论文 前言…………………………………………………………………………………………………………．8日U舌…………………………………………………………………………………………………………·8 材料与方法………………………………………………………………………-8 实验结果…………………………………………………………………………15 讨{仑………………………………………………………………………………………………………．．20 结1沧………………………………………………………………………………………………………·．23 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………25 五、参考文献…………………………………………………………………………26 六、附录 综述………………………………………………………………………………………………………··28 在学期间科研成绩………………………………………………………………36 致谢………………………………………………………………………………………………………～37 个人简介…………………………………………………………………………38 ·中文论著摘要· 抑制AM基因对卵巢癌细胞生长和化疗敏感性的影响 目 的 卵巢癌是女性生殖器官三大恶性肿瘤之一，死亡率居妇科恶性肿瘤的首位， 成为严重威胁妇女生命的肿瘤n’23。尽管经过初次手术和化疗达到完全缓解，但是 多数晚期患者仍会在两、三年内复发，且患者常常出现化疗耐药现象，预后不良。 常规的手术、化学疗法均难以明显提高晚期患者的生存率。目前基因的靶向治疗 日益受到关注，已经成为治疗肿瘤的新趋势，寻找到有效的治疗靶点，并且实施 干预有可能在有效抗击肿瘤的同时，抵消治疗所带来的副损伤。 肾上腺髓质素(adrenomedul1in，AM)是一种新的血管活性肽，广泛分布于肿 瘤组织，受到肿瘤组织缺氧环境的诱导，参与肿瘤的血管生成、抵抗肿瘤细胞凋 亡、帮助免疫逃逸等过程，表现出同肿瘤的生长、浸润、转移等生物学行为十分 密切的关系∞3。已有研究表明，AM在卵巢癌中过表达，其表达水平是卵巢癌侵袭 性的重要指标，肿瘤组织中AM过表达，卵巢癌患者临床预后差口1。我们前期实验 发现，AM可显著促进卵巢痛细胞增殖H1，AM受体阻断剂(AM22—52)可明显抑制卵 巢癌细胞的增殖璐1。 本研究中，我们利用RNA干扰(RNA inRNA，shRNA)转染卵 卵巢癌细胞中高表达的AM基因的短发夹状RNA(short hairp 巢癌细胞，以达到下调细胞中AM基因的表达，进一步观察AM对卵巢癌细胞的增 殖凋亡及化疗敏感性的影响。 方 法 RNA si 1．利用Genescript blast比对确定其特异性。 重组质粒pRNA—U6．1／neo—AMshRNA，于大肠杆菌DH5Q扩增后，质粒纯化后测 序验证序列的准确性。 3．利用lip02000转染试剂将质粒pRNA-U6．1／neo-AMshRNA稳定转染至卵巢癌细 胞株H08910中，经G418筛选后获得稳定的单克隆细胞株。 4．利用RT—PCR、Real—time blot