正中中缝核注射,7-二羟色胺对致痫大鼠癫痫发作及学习记忆的影响.pdfVIP

正中中缝核注射 5,7-二羟色胺对致痫大鼠癫痫发作及学习记忆 的影响 中 文 摘 要 【目的】 建立匹罗卡品（PILO ）癫痫大鼠模型，于中脑正中中缝核局部微量注射5，7- 二羟色胺（5,7-DHT ），观察癫痫大鼠痫性发作、中缝核 5-羟色胺（5-HT ）能神 经元数目、海马细胞外5-HT 及其代谢产物5-吲哚乙酸（5-HIAA ）浓度的变化， 探讨脑内5-HT 与癫痫的关系；同时评估癫痫大鼠在Morris 水迷宫（MWM ）实 验中的学习记忆能力，探讨癫痫大鼠学习记忆改变的可能机制。 【方法】 1、实验动物分组：SD 大鼠随机分为三组：空白对照组（NS ），匹罗卡品组 （PILO+NS ），匹罗卡品组+5 ，7-二羟色胺组（PILO+5,7-DHT ）。 实验第一部分 根据注射PILO 后是否出现癫痫持续状态（SE）再将PILO+NS 组分成：出现SE 组（PILO+SE ）和未出现SE 组（PILO-SE ），同时将PILO+5,7-DHT 组无发生SE 大鼠剔除。 2 、在脑立体定位仪帮助下，根据 Watson 《大鼠脑立体定位图谱》，将记录电极 置入右侧额叶皮层，微透析引导管置入右侧海马，并于大脑正中中缝核注入 5,7-DHT 。 3、制作PILO 癫痫模型：腹腔注射PILO320mg/kg 或30mg/kg （16-18h 前腹腔注 射LiCl 127mg/kg ），然后30min 内连续观察大鼠是否有痫性发作，根据Racine 分级，发作级数达到IV 级及IV 级以上并持续时间30min 时判定为SE。 4 、利用视频脑电图观察癫痫大鼠急性期、潜伏期、慢性期癫痫发作及皮层脑电 变化。 5、运用MWM 实验行定位航行实验和空间探索实验，测评大鼠空间学习记忆能 力。 6、运用色氨酸羟化酶标记的免疫组化法观察大鼠中缝核5-HT 能神经元数目。 7、利用脑微透析结合高效液相(HPLC) - 电化学检测(ECD)技术动态监测海马细胞 外5-HT、5-HIAA 的浓度变化。 4 【结果】 1、造模成功率、死亡率：大鼠予以5,7-DHT （PILO+5,7-DHT 组）处理后PILO 造模成功率、死亡率均增高（P0.05 ）。 2 、行为学变化：腹腔注射 PILO 后，点燃大鼠出现急性期、潜伏期、慢性期三 期行为学改变；在慢性期，PILO+5,7-DHT 组大鼠自发性发作频率较出PILO+SE 组明显增高（P0.05 ），而PILO-SE 组大鼠，在慢性期并没有观察到自发性发作。 3、脑电图改变：急性期：点燃大鼠可见癫痫波，多为棘波、棘慢波；潜伏期： 脑电图以a 波为主，偶可见低波幅快波或棘波、棘慢波；慢性期：出现典型的高 波幅棘波、尖波、棘-慢复合波和尖-慢复合波，呈阵发性发放。 4 、MWM 实验测评：与NS 组比较PILO+SE 组平均逃避潜伏期延长、穿越平台 的次数减少、原平台象限停留时间缩短（P0.05 ），而与 PILO+SE 组比较 PILO+5,7-DHT 组变化不明显（P0.05 ）。 5、中缝核5-HT 能数目：与NS 组比较PILO+SE 组大鼠中缝核5-HT 能神经元数 目有所下降（P0.05 ），而PILO+5,7-DHT 组下降更明显（P0.01 ）。 6、海马细胞外5-HT、5-HIAA 浓度变化：急性期海马细胞外5-HT、5-HIAA 的 浓度较NS 组明显增高（P0.05 ），潜伏期逐渐降至正常水平（P0.05 ），慢性期 低于NS 组水平（P0.05 ）；慢性期PILO+5,7-DHT 组海马细胞外液5-HT、5-HIAA 水平较PILO+NS 组明显降低（P0.05 ）。 【结论】 1、在PILO 致痫大鼠模型中建立了稳定的脑微透析技术并进行微透析活体取样， 为后期动态监测海马细胞外液5-HT、5-HIAA 的浓度变化奠定了基础。 2 、海马细胞外液5-HT 的浓度降低可能是诱发癫痫发作的机制之一，5-HT 对癫 痫具有抑制作用。 3、癫痫发作可引起癫痫大鼠空间学习记忆功能下降，但尚不能认为癫痫大鼠合 并认知功能障碍与脑内5-HT 水平下降有关。 【关键词】癫痫；学习记忆；Morris 水迷宫；5-羟色胺；5，7-二羟色胺；脑微