血管内皮细胞生因子调节肿瘤细胞多药耐药相关蛋白1表达的研究.pdf

江苏大学硕士论文 摘 要 目的：1．采用重组人血管内皮细胞生长因子(VEGF)分别作用 于人白血病细胞株K562、胃癌细胞株BGC．823后，检测多药耐药相 与肿瘤细胞多药耐药(MDR)之间的关系。2．构建含MRPl基因启 动子的重组荧光素酶报告基因载体，并检测其在VEGF作用下转录 活性的改变。3．从MRPl基因转录调控入手，分别检测Akt，P．Akt，转 录因子SPl的蛋白表达水平以及SPl与DNA的结合活性，初步探讨 位点突变序列的重组荧光素酶报告基因载体，并检测其在VEGF作 用下转录活性的改变。 方法：1．不同浓度的VEGF分别作用于肿瘤细胞24h后，应用 SYBRGreen 1 mRNA I荧光染料，采用qRT-PCR检测各组细胞MRP 的表达情况，根据标准曲线计算出MRPlmRNA表达量；免疫印迹 法(Western blot法)分别检测各组细胞MRPl蛋白表达水平。2．合 成MRPl基因启动子片段，克隆到荧光素酶报告基因载体PGL3．Basic 荧光素酶活性分析VEGF作