角膜真菌感染黏分子机制的实验研究.pdfVIP

摘 要 目的： 通过构建真菌与角膜上皮细胞相互作用的三种模型，探讨角膜真菌感染过程中 黏附的分子机制和生物学效应。 方法： 第一部分真菌激活人角膜上皮细胞FAK信号转导通路的体外实验研究 将三种常见致病真菌(白色念珠菌、烟曲霉菌和茄病镰刀菌)分别与人角膜上 膜上皮细胞的细胞毒性作用；RT-PCR检测真菌黏附人角膜上皮细胞后不同时间细胞 蛋白㈣基因的表达情况；Westernblot的方法检测黏附信号转导途径相关蛋白 息通路活化的抑制作用；免疫细胞化学方法观察人角膜上皮细胞与真菌相互作用过 定位，并观察真菌刺激后人角膜上皮细胞骨架的变化；流式细胞仪定量检测人角膜 上皮细胞ITGl31与PAX在真菌黏附后表达的改变；光学显微镜观察真菌与人角膜上 皮细胞黏附数量，记录并测定了黏附后积分光密度值(OD)；扫描及投射电镜观察 了真菌与人角膜上皮细胞黏附后，细胞超微结构的改变。 第二部分真菌对人角膜上皮细胞黏附移行能力的影响 利用Transwell小室构建真菌与人角膜上皮细胞共培养体系，建立三种常见致病 真菌(白色念珠菌、烟曲霉菌和茄病镰刀菌)与人角膜上皮细胞相互作用的模型， 实验共分四组，第一组：人角膜上皮细胞接种于上室内凝胶上，待80％融合后在下