s-腺苷蛋氨酸乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增殖及胶原表达的影响.pdfVIP

S一腺苷蛋氨酸对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞 增殖及胶原表达的影响 摘 要 fibrosis，HF)是各种慢性肝损伤向肝 目的：肝纤维化(hepatic 硬化发展的中间阶段，其发生与发展受多种因素调控，但其中心环节 stellate 是各种刺激因子诱导肝星状细胞(hepaticcells，HSCs)的活 matrix，ECM)， 化及增殖，并产生大量的细胞外基质(extracellular 沉积于肝组织中，进一步发展即形成肝硬化。因此，抑制HSCs的活 化与增殖、诱导其凋亡是阻止肝纤维化发生与发展的关键。S．腺苷蛋 苷蛋氨酸合成酶作用下催化合成的一种天然化合物，广泛存在于人体 各种组织和体液中，参与体内多种生化反应，是生物甲基化反应的必 需中间体，直接为甲基受体提供甲基。另外，SAM还可通过转硫作 对抗氧自由基及炎性物质对细胞的损伤。目前，外源性的SAM在临 床上主要被用于治疗各种病因引起的肝内胆汁淤积，其机制与SAM 提供甲基和转硫基作用相关。低甲基化状态与酒精性肝病引起的肝纤 维化有密切的关系，SAM作为生物甲基化的必需中间体，在理论上 有可能影响肝纤维化的过程。本研究旨在观察SAM对乙醛 以及I型矛UlII型胶原表达的影响，为SAM在临床上用于预防和治疗 肝纤维化提供理论依据。方法：体外培养大鼠肝星状细胞株 (HSC．T6)，将细胞分为空白对照组、乙醛对照组(200 lamol／L)、O．15 mmol／L mmol／LSAM+200AA)、0．5mmol／L SAM组(0．15 pmol／L mmol／LSAM+200 mmol／LSAM组(1．5 SAM组(O．5 l上mol／LAA)、1．5 mmol／LSAM+200AA)、5．0mmol／LSAM组(5．0mmol／L l_Imol／L SAM+200AA)、15．0mmol／LSAM组(15．0mmol／LSAM+ l上mol／L 200 光学显微镜观察细胞形态变化，MTT法检测细胞增殖。依据实验结 果，选择其中的两个剂量用于后续实验。将细胞分为空白对照组、乙 mmol／L mmol／L 醛对照组(200 SAM组(1．5 SAM+200 lamol／L)、1．5 AA)、5．0mmol／L mmol／LSAM+200 Itmol／L SAM组(5．0 lamol／L AA)，SAM干预培养1h后再加入乙醛，培养24h后采用反转录聚合 酶链式反应(Reverse chain transcriptionpolymerase 镜下见空白对照组HSC．T6细胞生长良好，呈梭形或星形。与对照组 比较，乙醛对照组细胞数目增多，排列密集，细胞间间隙更小，细胞 周边伪足更多更长，胞体呈星形或不规则形。与乙醛对照组比较， SAM干预培养的各组细胞数目减少，细胞间的间隙增大，细胞周边 伪足减少，细胞呈短梭型或扁平形，并随着SAM浓度的升高，此变 化更加明显。 2．M1vr法检测结果显示，空白对照组、乙醛对照组、 0．15mmol／LSAM组、O．5mmol／LSAM组、1．5mmol／LSAM组、5．0 mmol／L mmol／L SAM组、15．0 SAM组的吸光度值(OD值)分别为 醛对照组OD值明显升高，差异有