shrna抑制子宫内膜癌细胞株ishikawa细胞her-2neu基因表达的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· Her-2／neu基因表达的研究 目 的 观察质粒载体介导的shRNA干扰技术能否有效抑制人子宫内膜癌细胞株 Ishikawa HER．2基因的表达。RT—PCR法检测实验组和对照组之间转染后mRNA 水平之间是否有差异。Western Blot法检测实验组和对照组之间转染后P185蛋白 表达是否有差异。 材料及方法 design 4．1一CMV 比率在45％到55％之间。选用pSilencervectors(Ambion)作为质粒载体， 构建两条针对HER2基因的特异性重组质粒。首先进行细胞传代，传至足够数量 的细胞后冻存备用。利用大肠杆菌JMl09作为感受态菌进行大量的质粒扩增，以 核表达载体的阴性对照组。三组shRNA的真核表达载体转染人子宫内膜癌 Ishikawa细胞后，RT．PCR法检测转染后24、48、72hHER2基因mRNA的表达。 Western Blot法检测转染后24、48、72hHER2基因P185蛋白的表达，对比三组 之间的差异。 结 果 构建成功。RT．PCR结果表明，在转染后24h、48h及72h后Her-2／neu1与Her-2 ／neu 2组的mRNA水平分别下降为非特异Her-2／neucon组的70．1％和80．2％、 抑制her-2基因的表达。而WesternBlot法检测P185蛋白水平分别下降为非特异 Her-2／neu 了两条特异链在蛋白水平的抑制作用。相比较1链的抑制作用更为明显。 结论 1、两个shRNA．HER2与阴性对照shRNA．CON真核表达载体构建成功； 细胞HER2基因的表达。 4、RNA干扰技术为子宫内膜癌基因治疗提供了新策略。 关键词 Ishikawa细胞；短发夹状I矾A；表皮生长因子受体2；RNA干扰。 2 ·英文论著摘要· shRNA inhibitionofhumanendometrialcancercell line IshikawacellsHer--2／neu geneexpression Objective Observationof vector-mediatedshRNAinterference call technologyeffectively inhibithumanendometrialcancercelllineIshikawaHER-2 gene Detectionof andcontrol betweenthemRNAlevelafter experimental groups transfectionwhetherthereis difference any between．WesternBlotDetectionof andcontrol betweentheP185transfectedwhetherthereare experimental groups differencesin proteinexpression． MaterialsandMethods Ishikawacells fromCellInstituteatthe Schoo