延长针刺镇痛时对tnc神经元非突触部位胞吐及膜再循环的影响.pdfVIP

中文摘要 延长针刺镇痛时间对TNC神经元 非突触部位胞吐及膜再循环的影响 摘 要 三又神经脊束核尾侧亚核(TNC)与头面部痛觉的感受、 传递及针刺镇痛作用的发挥有关。在头面部针刺镇痛可影响 该核内某些肽类递质的释放，说明这类递质的释放与针刺镇 痛效应的发挥关系密切。在延长针刺时间的情况下，这类递 质是在什么因素的作用下释放的以及递质释放后囊泡膜足 如何参与再循环的机制尚不十分清楚，因此，进1步研究含 肽类递质的大致密核心小泡(LDV)在延长针刺镇痛时间的 情况下，其胞吐的部位、方式及其释放递质后膜甲衡的恢复 具有重要意义。 目的： 本实验在延长对大鼠针刺镇痛时问的条件下取材，在电 镜下观察三叉神经脊束核尾侧业核内LDV非突触部位胞吐 及胞吐后膜再循环的形态学依据，以期为神经化学、神经生 理学、免疫组织化学、药理学等的研究提供形态学方面的可 靠资料。 材料与方法： 用成年wistar大鼠48只，体重180～2209，随机分为实 验、对照两组，对照组24只，实验组24只。将实验、对照 两组再分别随机分为6个小组，每小组4只。给予实验各组 大鼠双侧前爪跖侧皮下注射5％福尔马林0．2ml，致痛10分 钟后，将电针刺入大鼠相当于“四自”穴处，分别给予电针 中文摘要 4、6、8、10、12、14h，时间’到立即向腹腔注入乌拉坦(1眺曲 麻醉，经升主动脉插管灌注生理盐水100ml，继之灌入2％ 多聚甲醛、2％戊-二醛、2％单宁酸混合液(pH7．2—7．4)200ml， VT 同定后取出延髓，用Leica1000S振荡切片机于门下2ram 处向尾侧切取150um厚度脑干切片3片，再于光镜下选区 切取胶状质的中间部分，2％戊二醛前固定2h，PBS冲洗， 1％锇酸后固定，梯度丙酮脱水，Epon812包埋，经ULTRU．E llm)， 超薄切片机切片，每例捞取3个网(200个目，同宽80 铀、铅双染，JEM一1000CXII型TEM下观察并拍片。对照 组除不给予针刺外，其余处理与实验组完全相J司。 结果： 1．本实验用形态学与机能相结合的方法，电镜下观察了 延长针刺镇痛时问后，LDV非突触部位胞吐的动态过程，捕 捉到了LDV非突触部位胞吐的影像，据此分析其胞l：|r过程 町能是：1)在膜电位改变和有关膜蛋白质的参与F，LDV 向质膜趋近、接触、融合。2)融合处质膜破裂通道形成， LDV内的递质开始向细胞间隙释放。3)通道开口进4步开 放、扩大，LDV内所含递质完全释放入细胞间隙。4)LDV 将递质释放后，其单位膜融入细胞质膜，随胞Ⅱ+l：物质的弥散， 胞吐痕迹消失。在针刺镇痛过程中，实验组动物的非突触部 位胞吐明显多于对照组，两组问差异显著(P0．01)，说明 与镇痛有关的神经元主要是通过非突触部位胞吐释放LDV 内递质的方式而参与痛觉调节过程的。 2．给予实验组动物不同的针刺时间(4、6、8、10、12、 14h)后，灌流杀死取材，用电镜方法观察记数三叉神经脊 束核尾侧胶状质亚核内大单壁小泡、双壁有衣小泡的形态、 中文摘要 数量及变化规律，二者中大单壁有衣小泡数量与针刺时间无 明显正比关系，双壁有衣泡(DWCVs)有明显增长趋势， 且随时问而变化。DWCVs形态变化较大，可分为5种类型： 1)尚未与质膜脱离的孤立DWCVs；2)游离于终末内孤立 的DWCVs；3)未与终末质膜脱离的融合性DWCVs簇；4) 游离于终末内的DWCVs簇；5)一个终末的质膜膨出并嵌 入与之相对应的另一终末的质膜形成的凹窝中，二者形成尚 未与双侧质膜脱离的DWCVs。DWCVs可分别由相邻的轴一 树、轴一轴、树一树的质膜共同构成，轴一树最多。 3．在针刺镇痛中，实验组DWCVs的数量随时问而波 动，在1一10h内，DWCVs的增长与时间成正比，10h达到 高峰，此后开始逐渐下降，文至24小时基本恢复正常。对 照组仅见少数孤立的DWCVs。 结论： 在延长针刺镇痛时间过程中，三又神经脊束核尾侧胶状 质业核内轴突终术LDV非突触