新基因mipu对h9c2心肌细胞bid基因表达的影响及其机制研究.pdfVIP

摘要 近年来，越来越多的研究表明，心血管疾病的发生发展与细胞 凋亡有关。多种刺激均可诱导心肌细胞凋亡，如缺氧、缺血再灌注、 factor necrosis 氧化应激及肿瘤坏死因子a Tumor 0【，TNFa 等。其中， TNF 1可通过与心肌细胞膜上TNF．R1结合，激活死亡受体途径介导 细胞凋亡。Mipul是本实验室克隆的一个大鼠心肌缺血预适应诱导 一个锌指蛋白型转录抑制因子。而生物信息学分析发现Bcl．2家族成 员Bid基因启动子区含有Mipul的结合位点，因此本研究旨在观察 表达的调控作用，从而探讨Mipul减轻n吓0【所致H9c2心肌细胞 凋亡的机制。 本研究拟采用TNFa 20 ng／ml，24h 处理大鼠心肌细胞H9c2，建 立细胞凋亡模型。通过瞬时转染Mipul真核表达质粒 色、流式细胞术 flow Bid基因表达水平的影响，采用细胞间接免疫荧光术、Western．blot、 PCR 方法检测 RT-PCR及荧光实时定量PCR Real—timequantitative Detection 控的机制，采用荧光素酶报告基因及Target Assay检测Bid 基因转录活性及Mipul蛋白与Bid启动子区的结合作用。 主要结果如下：①n盯O【处理H9c2细胞后，细胞凋亡百分率明 VS 显增加 p 0．01 VS 诱导的H9c2细胞凋亡