溃疡性结肠炎相性结肠癌动物模型建立及癌变机制初探.pdfVIP

目录 中文摘要……………………………………………………………………．4 Abstract……………………………………………………………………………………………．．7 —!L．、一 日IJ舌…………………………………………………………………………………………………1O 第一部分：溃疡性结肠炎相关性结肠癌动物模型的建立………………13 一、实验材料…………………………………………………………13 二、实验分组…………………………………………………………13 三、统计分析…………………………………………………………15 5 四、实验探索…………………………………………………………1 5 同一分予量彳 同浓度建立结肠炎模型的探索………………………l 五、实验结果……………．．-…………………………………………16 5、1造模小鼠不例浓度Dss结果比较…………………………．．16 7 5、2造模一般情况………………………………………………．．1 5、3造模小鼠的大体病理变化…………………………………．．18 5、4造模小鼠的组织学变化……………………………………．．20 六、讨沦…………………………………………………………………………………．．23 七、小结…………………………………………………………………………………．．25 关结肠癌及正常组钐 中的表达情况及k—ras基冈突变情况………………26 一、研究方法…………………………………………………………26 二、实验结果…………………………………………………………33 三、讨论……………………………………………………：…．：……一40 四、小结………………………………………………………………．44 实验总结……………………………………………………………………45 结论…………………………………………………………………………………………………46 参考文献……………………………………………………………………47 综述：溃疡性结肠炎相关性结肠癌癌变机制的研究进展………………50 致谢…………………………………………………………………………………………………57 中文摘要 研究背景：溃疡性结肠炎是一种原因未明的结直肠炎性病变，随着病程 延长，癌变风险增加。但目前由于溃疡性结肠炎痛变临床病例积累需较 长的时间，存在一定难度，建立溃疡性结肠炎癌变的动物模型起到了重 要作用。目前关于溃疡性结肠炎动物模型较多，近年来，少数研究者发 现小鼠饮用葡聚糖硫酸钠和普通饮用水数个循环，可有不典型增生和癌 变的发生，但所需实验周期较长并且癌变率低【1，列。文献报道予以小剂量 刺激，可于短期内 12周 建立溃疡性结肠炎癌变的动物模型‘31。关于 溃疡性结肠炎癌变的机制目前认为Wnt途径中的关键蛋白，B—catenin 在溃结相关性结肠痛发病机制中起着关键作用。在散发性结肠癌发病机 制Il】，APC突变通常被认为是一个早期事件【41，而在溃疡性结肠炎相关 性结肠癌中早期相对少见，而通常发生在晚期‘51。相反地，P53突变通 常被认为是“腺瘤——癌变途径的晚期事件【钔，但在溃疡性结肠炎患 者中，P53突变通常在早期发生，而且可以在非不典型增生和未定义不 典型增生的粕膜病变中检出【61。在本研究中，我们摸索通过小剂量AoM 腹腔注射联合3个周期的葡聚糖硫酸钠 分子量36，ooO一50，000，浓度 为3％一2％一2％ 建立溃疡性结肠炎癌变的动物模型，并初步探索APC，B 此为研究人类溃疡性结肠炎癌变的机制提供一定的提示线索。 研究目的：通过摸索建立溃疡性结肠炎癌变的动物模型，借助动物模型， K．ras基岗第一外显子第12密码子的突变情况，初步探索人类溃疡性结 肠炎癌变的分子机制以及早期诊断的指标。 方法与材料：我们选择4—5周龄雄性C57BL小鼠，随机分为四组：A组 只 ，D组为空白对照组 12只 。于SPF级动物房适应性喂养1周后， 以上述过程为1个循环，重复两个循环 采用2％DSS ，B组及C组分别 岁 给予AOM腹腔注射或DSS喂养，D组不予任何处理。实验过程中每卜2 天记录小鼠体重、皮毛、精神状态及排便情况，分别于每个循环末各组 均处死4只小鼠， 3个周期结束后处死全部小鼠 8只／组 。采用乙醚 麻醉断颈，分别取远端、近端结肠组织各一块，若可见肉眼肿块，取肿 块标本同定，余下标本冻存，显微镜下观察不同时期组织病理变化，通 过免疫组化的方法，采用兔抗人多克隆抗体：抗13一catenin抗体 Abcom ，抗APC，抗P53抗体 Santa P53在各阶段的结肠粘膜中的表达情况。同时采用天根的组织DNA提取 试剂盒通过提取冻存组织DN