栉孔扇贝大规模亡致病病原研究.pdfVIP

栉孔扇贝大规模死亡致病病原研究 摘要 摘要：对来自不同疫区的濒死的栉孔扇贝(Chlamysfarreri)消化腺、肾、 和肠进行超薄切片及电镜观察，在上述组织细胞质内发现大量的球形病毒粒 子并伴有明显的病理学变化。该病毒粒子具有囊膜，完整的病毒粒子直径为 包涵体存在。 体(Rickettsiaorganism,R0)毒种对健康扇贝进行人工感染。结果显示 病毒注射组病贝出现和疫区病贝相同症状，死亡率明显高于对照组。电镜复 检结果显示，发病扇贝的外套膜、鳃、消化腺组织中分布有大量病毒粒子， 该病毒粒子的形态特征、病理学特征与自然海区发病扇贝中的病毒粒子特征 完全一致。人工感染实验结果证明，栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒是栉孔 扇贝大规模死亡的致病病原。 经组织匀浆、差速离心和密度梯度离心，分离纯化出的病毒粒子与超薄 切片的病毒粒子形态一致、大小相近，且可观祭到病毒囊膜表面覆有囊膜纤 突。以蛋白酶k裂解法，异硫氰酸胍．酚．氯仿一步法，TRAZOL试剂法提取 该粒子的核酸分别进行TAE琼脂糖电泳和MOPS琼脂糖变性电泳，结果表 明该粒子的遗传物质为核糖核酸，是一神RNA瘸毒。 为了建立基于病毒核酸检测的扇贝大规模死亡监测技术，首先建立了 病毒核酸分子克隆实验体