肿瘤细胞来源的导多能干细胞研究.pdfVIP

目 录 目 录…………………………………………………………… 缩略词表………………………………………………………… 中文摘要………………………………………………………………………………3 Abstract…………………………………………………………………………………………………．4 前日U 言…………………………………………………………………………………………………．．5舌…………………………………………………………………………………………………．．￡ 材料与方法……………………………………………………………………．．13 一、材料：………………………………………………………………………………………13 二、实验方法……………………………………………………………………………………l7 实验结果…………………………………………………………………………26 1．B1 6一F1 O．282．iPS细胞的生长和形态学特征………………………………………………26 2．X—gal染色结果………………………………………………………………………………28 3．碱性磷酸酶染色结果………………………………………………………………………一29 1 4．实时定量PCR结果分析……………………………………………………………………3 讨论…………………………………………………………………………………………………．．39 结j沦…………………………………………………………………………………………………．．41 参考文献……………………………………………………………………………．42 文献综述………………………………………………………………………一44 诱导多能干细胞的研究进展……………………………………………………………………44 致谢…………………………………………………………………………．52 缩略词表 缩略词 英文全称 中文全称 saline Dulbecco’s 不含钙、镁的磷酸缓冲盐溶液 CMF．DPBS phosphate-bu位red withoutcalciumand magnesium media modi6ed DMEM高糖培养基 DMEMDulbecco’s eagle DOX hydrate 水溶性强力霉素 Doxycycline ES Embn，onicStemCell 胚胎干细胞 bovineserum 胎牛血清 FBS Fetal iPS Induced StemCeU 诱导多能干细胞 Pluripotent reaction 聚合酶链式反应 PCR Polmerasechain saline 磷酸缓冲盐溶液 PBS Phosphate-bufI’ered Realtime PCR 实时定量PCR qPCR quantitative rouIldsminute 每分钟转数 印m per TAEbu能rTris．acetate．EDl’Abu丘’er Tris一乙酸．EDl’A缓冲液 2 中文摘要 StemCell，iPS 诱导型多能性干细胞 Induced cell 是一种人工诱导 Pluripotent 获得的多功能的干细胞，可以由各种终端分化细胞诱导表达一系列特定因子生成。 StemCell，ES 由于使用胚胎干细胞 Emb巧onic cell 进行科学研究和医学治疗面 临人类伦理道德的阻碍，人们将越来越多的关注放在了诱导型多功能干细胞上。 2006年，Ymallaka实验室通过表达不同的转录因子成功诱导小鼠体细胞成为 iPS细胞。2010年Rudolf Jaenisch和TllijnR．Bnlmmelk锄p实验室成功将来源于人 chr0Ilic 类慢性髓性白血病 human myeloid 细胞。但是迄今为止，实体肿瘤细胞是否能够被诱导为诱导型多能性干细胞还不清 楚。 我们应用piggyBac转座子和四环素介导的基因表达系统，在小鼠黑色素瘤来源 的转染效率约为O．1％，在第3周末形成与多能性干细胞形态相似的克隆的诱导效率 也表现出部分不同于ES细胞和iPS细胞的性状。如第5周时碱性磷酸酶染色呈弱阳 性。 我们的结果表明，从实体瘤诱导的iPS细胞可能有多个阶段，需要更多的内源 性和外源性的因子。我们建立的小鼠黑色素瘤来源的iPS细胞诱导系统为进一步研 究肿瘤发生发展、干细胞和细胞分化的分子机理奠定了基础。 关键词： 肿瘤细胞； iPS细胞；诱导； 重编程 Abstract Induced stem be f．romVariousdifrerentiated cells iPSCs can pluripotent generated ce