环境生物技术课件生物技术在环境工程中的应用精要.pptVIP

第十二章 微生物学新技术在环境工程中的应用 内容提示 本章概要介绍酶、微生物制剂、生物表面活性剂、生物絮凝剂和沉淀剂等制备技术在环境工程领域的应用前景；可以提高处理效率，而且符合环保，愈来愈受到关注。 利用生物质能的微生物发酵产氢，提供清洁能源很有希望，有应用的可能性和实用性。 微生物学新技术 遗传诱变育种 基因工程 酶工程 微生物制剂 生物表面活性剂等的技术 生物絮凝剂和沉淀剂 此处简单介绍适宜在环境工程领域应用的几种。 第一节 固定化酶和固定化细胞在环境工程中的应用第二节 微生物细胞外多聚物的开发与应用第三节 优势菌种与微生物制剂的开发与应用第四节 微生物能源的开发与应用 第一节 固定化酶和固定化细胞 在环境工程中的应用 酶在微生物体内的一切生物化学反应中起着极其重要的催化作用，将它提取出在体外也能发挥其作用。故能将酶制成酶制剂，在食品加工、印染中棉布退浆、生丝脱胶，制革、制茶、化妆品、发酵工业、医疗、洗涤剂、污（废）水生物处理、废气生物净化等均可应用。根据各行业的需要可使用不同剂型的酶制剂。 一、酶制剂剂型 （一）干燥粗酶制剂 将用麸曲或深层发酵的培养液除菌（或不除菌）后，与淀粉等惰性填料混合、干燥制成粗酶。 （二）稀液体酶制剂 将培养液过滤除去菌体等杂质后，直接加稳定剂(甘油、乙醇、氯化钠等的复合物)和防腐剂作为商品出售。国内许多白酒厂用此种液态糖化酶制剂糖化淀粉。 （三）浓液体酶制剂 将培养液过滤除去菌体等杂质、浓缩后再加稳定剂和防腐剂成商品。 （四）干燥粉状酶制剂 我国多数生产此种酶制剂。其制备工艺为： 二、酶的提取 （一）预处理 在提取酶之前要作预处理。不同的酶有不同的预处理方法。 1.??胞外酶的预处理和制备 存在培养液中，只需将菌体过滤或离心去除，所得的清液即为粗酶液。如果是固态发酵麸曲，用水或缓冲液浸泡，再离心或过滤去菌体及杂物后所得清液即粗酶液。粗酶液再经提纯即酶精制品。 2.??胞内酶的预处理 胞内酶需要破碎细胞壁和质膜，然后制成无细胞提取液，再提纯。 破碎细胞的方法有：干燥法(空气干燥、真空冷冻干燥、溶剂脱水干燥)、机械法(研磨法、机械捣碎)、超声波破碎、反复冷冻法、自溶法、溶菌酶法。  (二) 酶的提取 酶是比较脆弱的物质，处理不当容易变性，提取前要对目的酶的等电点、pH、温度的稳定性、氧化还原剂对酶的影响有所了解。 1.水溶液提取法 用稀的盐溶液、缓冲液或水提取。稀盐、缓冲溶液和水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取酶常用的溶剂，提取液的用量是培养液体积的1～5倍。在提取时要均匀地搅拌，以利于蛋白质的溶解。同时根据不同酶的性质控制好提取温度。多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，适当提高温度，但时间不宜过长，需缩短提取时间。避免温度过高导致酶蛋白质变性失活，一般在5℃以下操作。为了避免提取过程中酶被蛋白水解酶降解，可加入二异丙基氟磷酸和碘乙酸抑制蛋白水解酶活性。特别注意提取液的pH和盐的浓度。 （1）pH：酶是具有等电点的两性电解质，提取液的pH应选择在偏离等电点两侧的pH范围内。用稀酸或稀碱提取时，防止过酸或过碱而引起酶蛋白可解离基团变化，而导致酶蛋白构象的不可逆变化。碱性酶用偏酸性的提取液提取，而酸性酶用偏碱性的提取液提取。 （2）盐浓度：稀浓度盐溶液可促进酶蛋白的溶解度，同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合，具有保护酶蛋白不易变性的优点，在提取液中加入少量NaCl（0.15mol/L）或其他中性盐。缓冲液常采用0.02～0.05mol/L磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液。 2.表面活性剂提取法 表面活性剂有天然的胆酸盐、磷脂，合成的有十二烷基硫(磺)酸钠(SDS、阴离子型)、二乙氨基十六烷基溴(阳离子型)、非离子型的有吐温(Tween)及三通－X(Triton－X)。 3.有机溶剂（丁醇）提取法 对不溶于水、稀盐溶液、稀酸或稀碱中的，和脂质结合比较牢固或分子中非极性侧链较多的酶，可用乙醇、丙酮和丁醇提取，以丁醇最佳。丁醇亲脂性强，特别是溶解磷脂的能力强；丁醇兼具亲水性；pH及温度选择范围较广，在溶解度范围内（注：0℃时其溶解度为10%，40℃时其溶解度为6.6%）不会引起酶变性失活。故需在低温下操作。 工业化生产蛋白酶（胞外酶）的提取操作步骤如图12-1。200 m3酶活力为200 u/mL的发酵原液,经过一系列提取步骤后制成了200 kg酶活力为