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上海交通大学医学院硕士论文 乙醇对斑马鱼血管发育的影响和机制探讨 摘 要 目的：人类胚胎期乙醇暴露对心血管系统有严重致畸作用。通 过观察不同浓度的乙醇处理对斑马鱼躯干部血管发育的影响，为探 讨乙醇对人类心血管系统发育和胎儿酒精综合征的机制提供一定的 线索。 方法：选取绿色荧光蛋白特异性标记血管的转基因斑马鱼，在 体观察乙醇对其躯干部血管发育的影响。用不同浓度（0% ，1%，1.5%， 1.75% V/V）乙醇处理斑马鱼胚胎（从出生后4.3 小时至3 天），观 察乙醇对斑马鱼胚胎致死率，致畸率，心跳和身长、和血管发育的 影响。用共聚焦显微镜在体观察斑马鱼躯干部血管发育情况。 RT-PCR 方法检测相关基因RNA 水平的表达变化。最后采用过表达 恢复实验进一步证明与之相关基因蛋白水平的功能。 结果：乙醇对斑马鱼胚胎致死率，致畸率，心跳和身长都有明 显影响，并呈浓度依赖性的特点。乙醇导致斑马鱼躯干部血管发育 明显异常:背主动脉 (dorsal aorta, DA)和后主静脉 (posterior cardinal vein, PCV)直径变细，背部纵向血管 (dorsal longitudinal anastomotic vessels,DLAV)到PCV 距离（躯干宽度），DA 到PCV 间距离以及体 节间血管 (intersegmental vessel, ISV)距离都显著变短，ISV 生长的角 - 4 - 上海交通大学医学院硕士论文 度也明显异常。另外，乙醇抑制了脊索旁血管 （parachordal vessels, PAV ）的生长，这些变化与乙醇剂量都有一定的关系。通过反转录 聚合酶链反应（RT-PCR ）方法和荧光强度统计得出，血管内皮细胞 生长因子受体 2 (vascular endothelial growth factor receptor two, VEGFR2 或称为Flk1), 随乙醇浓度增高表达降低。与PAV 生长相关 因子Netrin 1a, Unc5b 的表达与乙醇浓度呈反比。进一步Netrin 1a 过 表达实验表明该分子能部分地恢复乙醇对PAV 血管的抑制作用，提 示乙醇可能通过抑制Netrin 1a 的表达，进而抑制PAV 血管的形成。 结论：乙醇可导致斑马鱼躯干部血管发育明显异常，并呈浓度 依赖性，这可能与Flk1 基因表达降低有关。另外，乙醇还可能通过 抑制Netrin 1a 基因的表达，进而抑制PAV 血管的形成。 关键词：乙醇，胎儿酒精综合征，血管发育，Flk1 ，Netrin 1a - 5 - 上海交通大学医学院硕士论文 THE EFFECT AND POSSIBLE MECHANISM OF ETHANOL ON ZEBRAFISH VASCULAR DEVELOPMENT ABSTRACT Objective: Exposure to ethanol during human embryonic period has severe teratogenic effects on the cardiovascular system. In this paper, we focus on different concentration of ethanol treatment on zebrafish vascular development, which may provide clues to study the mechanism of human fetal alcohol syndrome. Methods: We chose transgenic zebrafish to observe ethanol’s effects