宫内移植骨髓间质干细胞对胚胎期显性脊柱裂胎鼠神经元重建的研究.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………．．1 英文论著摘要………………………………………………………………………4 二、英文缩略语………………………………………………………………………·8 三、论文 前言…………………………………………………………………………………………………………”9 刚舌…………………………………………………………………………………………………………” 材料与方法…………………………………………………………………………9 结果………………………………………………………………………………12 讨论…………………………………………………………………………………………………………21 结论…………………………………………………………………………………………………………24 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………25 五、参考文献…………………………………………………………………………26 六、附录 综述…………………………………………………………………………………………………………29 在校期间科研成绩………………………………………………………………38 致谢………………………………………………………………………………·39 个人简介…………………………………………………………………………40 ·中文论著摘要· 宫内移植骨髓间充质干细胞对胚胎期显性脊柱裂胎鼠 神经元重建的研究 目 的 tube 神经管缺陷(Neuraldefects，NTDs)是常见的先天性畸形之一，世界范围内 000--一9／1 发病率占总出生儿数的1／1 000，是世界卫生组织常规监测的疾病之一，目 前认为神经管缺陷是遗传因素和环境因素共同作用的结果，有家族遗传倾向。胚胎 发育过程中神经管发育缺陷可出现脑和脊髓畸形，其中脑裂和脊柱裂占所有类型 的95％，脊柱裂根据椎管内容物是否突出脊柱皮肤分为显性脊柱裂和隐性脊柱 裂。随着产前诊断技术的不断提高，越来越多的神经管畸形在孕中期或孕早期被 发现，但是产前治疗方面的研究却进展缓慢，许多母亲被迫选择终止妊娠，出生 后的神经畸形患儿的致残率和死亡率也较高。目前国内外应用胎儿外科技术进行 产前修补可以减少脑积水和脑疝的发生率，但对神经功能的恢复仍不理想，下肢 感觉运动功能障碍和尿便障碍仍然是常见的术后并发症。 干细胞移植治疗出生缺陷是目前较先进的治疗方法，宫内移植的优点包括：1． 由于胎儿在宫内生长发育快，因此为植入的干细胞生长繁殖提供了有利时机；2． MSCs经诱导分化后进行自体移植，不存在免疫反应，而且避免了社会伦理问题； 3．能够在疾病的早期得以及时治疗。目前利用干细胞移植技术治疗白血病及先天 性免疫缺陷性疾病以有报道，但关于宫内干细胞移植治疗神经管畸形的报道却很 少。 先天性神经管发育畸形的治疗一直是困扰国内外学者的难题。我们前期研究 发现，先天性脊椎裂鼠支配肛门外括约肌和肛提肌的脊髓运动神经元数量明显减 少，说明脊柱裂的脊髓神经元在胚胎期已经存在明显发育异常。因此我们认为在 显性脊椎裂患儿术后神经功能恢复的治疗中，神经元的再生或修复才是最重要的 治疗原则。移植的骨髓间充质干细胞(MSCs)可以转化为神经细胞，这为先天性 神经系统发育异常和神经系统退行性疾病的细胞替代治疗提供了可能。因此本研 究尝试利用MSCs进行宫内移植治疗先天性脊椎裂，并对移植后干细胞的迁移和 分化情况进行评价，探索先天性脊椎裂的治疗新方法。 材料和方法 一、实验动物 京医院实验动物中心提供。 2、动物模型10．12周龄Wistar孕鼠100只，体重250．3009。 二、方法 1、原代培养及腺病毒．EGFP转染：无菌条件下取大鼠骨髓用全骨髓贴 2、胎鼠先天性脊椎裂动物模型的建立：孕10进行4％维甲酸 (140mg／kg)胃管给药，利用药物致畸方法制作先天性脊椎裂动物模型。 3、干细胞移植： 利用胎仔外科方法将转染EGFP的MSCs经纤细玻璃针 注射到先天性脊椎裂胎鼠的脊髓中，并存活至20天，剖宫取胎。