利用CRISPR_Cas系统快速高效构建血友病乙小鼠模型.pdfVIP

Hereditas (Beijing) 2015 年 11 月, 37(11): 1143 ―1148 研究报告 利用CRISPR/Cas 系统快速高效构建血友病乙 小鼠模型 1 1 2 2 1 2 1 汪启翰 ，怀聪 ，孙瑞林 ，庄华 ，陈红岩 ，费俭 ，卢大儒 1. 复旦大学生命科学学院，遗传工程国家重点实验室，上海 200433 ； 2. 上海南方模式生物研究中心，上海 201203 摘要:血友病乙是由凝血因子Ⅸ(Factor Ⅸ，FⅨ)缺乏或功能缺陷导致的出血性疾病，为伴X 染色体 隐性遗传病。小鼠模型对于血友病乙的研究具有十分重要的意义，而基因组编辑技术又为小鼠模型 的构建提供了一种快捷而且高效的途径。本文利用CRISPR/Cas 系统，在小鼠F Ⅸ基因第 8 外显子上 选择靶位点，将Cas9 mRNA 和带有靶位点的sgRNA 显微注射到C57BL/6 品系小鼠的受精卵中，获 得基因修饰的小鼠。利用高分辨率熔解曲线分析(High resolution melting, HRM)技术进行精确基因分 型，并通过测序验证，在60 只小鼠中，总共有51 只小鼠的靶位点发生了突变，突变率高达85% ， 其中雄鼠的突变率为 79.5% ，雌鼠的突变率为 95.2%；未检测到非目标位置的基因编辑脱靶。凝血 活性实验显示，突变小鼠的F Ⅸ活性值(Factor Ⅸ coagulant activity, FⅨ: C)是非突变小鼠的 6.82% ， 大大低于非突变小鼠，表明突变小鼠的凝血活性缺失。本研究表明，利用 CRISPR/Cas 系统成功构 建了人类血友病乙遗传病小鼠模型。 关键词:血友病乙；CRISPR/Cas 系统；基因组编辑；小鼠模型 A quick and efficient method to generate hemophilia B mouse models by the CRISPR/Cas system 1 1 2 2 1 2 1 Qihan Wang , Cong Huai , Ruilin Sun , Hua Zhuang , Hongyan Chen , Jian Fei , Daru Lu 1. State Key Laboratory of Genetic Engineering, School of Life Science, Fudan University, Shanghai 200433, China; 2. Shanghai Research Center for Model Organisms, Shanghai 201203, China Abstract: Hemophilia B, or the Christmas disease, is a common human disease caused by coagulation factor Ⅸ 收稿日期: 2015−03−22 ; 修回日期: 2015−06−29 基金项目: 国家自然科学基金项目(编号资助 作者简介: 汪启翰，硕士在读，专业方向：生物工程。Tel: 021；E-mail : zgzjfhwqh@ ； 怀聪：博士在读，专业方向：人类医学分子遗传学。E-mail : huaic@ ； 孙瑞林：博士，专业方向：基因功能的模式生物研究。E-mail : rlsun@126.com ； 汪启翰、怀聪和孙瑞林同为第一作者。 通讯作者:卢大儒，博士，教授，研究方向：人类医学分子遗传学。E-mail : drlu@ 费俭，博士，教授，研究方向：基因功能的模式生物研究。E-mail ：Jfei@ DOI: 10.16288/j.yczz.15-117 网络出版时间: 2015-9-1 11:14:06 URL: /kcms/detail/11.1913.R1114.004.html 1144