化学性肝损伤及其肝癌的代谢组学的研究.pdf

摘要 化学性肝损伤及肝癌的代谢组学研究 摘 要 肝脏是机体最重要的代谢器官之一，而化学性肝损伤是引发多种 肝脏疾病的重要始动环节。因此，针对化学性肝损伤的发病机制以及 药物干预效应的研究，对慢性肝病的防治具有十分重要的意义。 动物实验是研究化学诱导急性肝损伤发病机制的必经之路，在研 究肝脏疾病发病机制及抗肝脏疾病药物的过程中，选择有科学性、实 用性、重现性的肝损伤动物模型的意义亦十分重要。在肝损伤的实验 研究中，四氯化碳(CCl4)诱导的化学性肝损伤和酒精性肝损伤模型 是比较常见的两种动物模型。本课题将利用建立的代谢组学方法，分 别对两种肝损伤模型动物的代谢特征开展研究，并利用代谢组学方法 对药物干预效应进行评价。同时，在动物模型研究的基础上，本课题 进一步尝试利用代谢组学方法，对临床原发性肝癌(PLC)患者的代谢 特征进行分析，探索将代谢组学方法应用于临床疾病机制研究的新思 路。 本课题首先建立了基于色谱质谱联用技术的肝组织的代谢组学 研究方法。在此基础上，重点考察了EEl。及酒精诱导的急性肝损伤大 鼠尿液及肝组织的代谢谱变化，并从代谢水平观察甘利欣对CCl。诱导 化学性肝损伤的保护作用及其机制。同时，在整体代谢水平上分析了 临床肝癌病人与正常对照人群的代谢谱差异。本课题的主要内容和结 果如下： 1．建立了基于氯甲酸乙酯衍生化(ECF)的气相色谱质谱联用 (GC／MS)分析以及基于三甲基硅烷(TMS)衍生的气相色谱飞行时间质 摘要 谱(GC／TOFMS)分析的肝组织代谢组学研究方法。针对前者的分析特 点，采用高氯酸乙醇两步提取法提取肝组织中的小分子内源性代谢 物，后者采用氯仿／甲醇／水的混合溶剂进行两步提取。两种分析方法 均经方法学验证表明重复性好、灵敏度高、精密度高，适用于肝组织 的快速、高通量检测。 2．采用ECF衍生、GC／MS分析的代谢组学研究方法，尝试着从 整体代谢水平上考察大鼠在CCl4诱导急性肝损伤过程中尿液及肝组 织中内源性小分子代谢物谱的变化，并观察甘利欣预防性给药对CCl4 诱导急性肝损伤的保护作用。结合多维统计方法，发现肝损伤大鼠尿 液和肝组织样本中小分子内源性代谢物发生了明显变化，并找到使得 正常组和模型组区分开的相关差异性代谢物，且尿液和肝组织样本代 谢谱所提供的信息相互补充，经初步分析CCl4诱导的急性肝损伤与 三羧酸循环、部分氨基酸代谢等高度相关。 3．以酒精诱导的大鼠急性肝损伤模型为研究对象，采用ECF衍’ 生、GC／MS分析的代谢组学研究方法检测了大鼠尿液及肝组织中内 源性小分子代谢物谱的模式变化情况，结果发现蛋氨酸代谢、三羧酸 循环及脂肪酸代谢等代谢通路变化与酒精诱导的急性肝损伤密切相 关。且模型组大鼠尿液及肝组织中部分代谢物的变化趋势与ccl4诱导 的急性肝损伤大鼠的相类似。 GC／TOFMS方法，对肝癌患者和正常对照人群的尿液及血液进行代谢 组学研究，尝试为肝癌诊断以及肝癌的病理机制理解寻找新的切入 点。研究结果发现，正常人与肝癌患者尿液和血液的代谢谱均有分离 趋势，进一步利用监督的正交偏最小方差判别分析(OILS．DA)方法能 摘要 清晰地观察到肝癌患者与正常对照之间尿液和血液代谢轮廓的差异， 通过对代谢网络变化的分析发现了与肝癌临床病理相关的代谢通 路一一能量代谢、苯丙氨酸、色氨酸、糖代谢以及一些其它的氨基酸 代谢的变化。 本课题在建立肝组织代谢组学方法的基础上，应用传统药理学指 标与代谢组学研究所揭示的生物化学变化相结合的方法，为CCl4及 酒精诱导的大鼠急性肝损伤的机制研究及药物药效作用的整体评价 提供新的思路和视野；并且发现代谢组学技术在肝癌的早期诊断甚至 分期上有很大的潜力，可以为临床诊断提供科学依据，非常值得进行 深入一步的研究。 关键词：肝组织，肝损伤，四氯化碳(ccl4)，酒精，肝癌，代谢组学， 氯甲酸乙酯，硅烷化，气相质谱联用(GC／MS)，气相色谱飞 乘法(PLS—DA)，正交偏最小方差判别分析(OPLS—DA) ABSTRACT C