runx3、dpk基因甲基化与胃癌关系的研究.pdfVIP

中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名：轴字绰 日期：幽：苎：!兰 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文． 论文作者签名： 指导教师签名： 日 期： ·中文论著摘要· RUNX3、DAPK基因甲基化与胃癌 关系的研究 前 言 目前的研究发现，胃癌中许多肿瘤抑制基因和肿瘤相关基因的失活是由于基 因启动子区的异常甲基化引起的。RUNX3蛋白是TGF-B超家族信号传导通路下 游的一个转录因子，介导TGF．p生长抑制的功能，在哺乳动物的发育及组织分化 过程中发挥重要作用，胃癌中，RUNX3基因功能缺失严重，但突变率很低，提 示存在其他的失活方式。DAPK蛋白是负责启动细胞凋亡的一种蛋白激酶，广泛 存在于各种细胞凋亡系统中，在凋亡过程的初期就被激活，活性持续到细胞发生 不可逆的自毁为止，对防止肿瘤的发生及遏制肿瘤的发展具有重要意义。 本研究采用MSP法检测了胃癌原发灶、癌旁正常组织及转移淋巴结中 RUNX3与DAPK基因的甲基化状态，以期揭示这两个基因甲基化与胃癌发生、 发展以及与胃癌临床病理特征的关系。 实验方法 标本来源：收集2005年2月至2005年8月间中国医科大学附属第一医院肿 瘤外科38例手术切除的胃癌组织，相应的癌旁正常组织和转移淋巴结。所取组织 离体后立即一分为二，一份置．70‘C冰箱中保存。另一份制作常规病理切片，HE 染色，确定病理诊断。所有胃癌患者术前均未行化疗或放疗，男性26例，女性 12例，年龄为36～80岁，中位年龄57岁。所有癌旁组织经病理检查未发现肿瘤 细胞，所取淋巴结组织经病理证实存在癌细胞。正常对照标本取自无消化系统疾 病及任意肿瘤的正常人外周血。 DNA 文献方法进行DNA预处理，之后用Wizard Clean-upSystem纯化，方法按说 增甲基化酶SssI修饰和未修饰的正常人外周血DNA作为甲基化阳性和非甲基化 阳性对照，以去离予水替代DNA模本作为阴性对照。冰上配制PCR反应体系，于 PCR仪中扩增。 结果判定：取5ttI 成像仪观察并摄像。获得甲基化产物即可判定为甲基化阳性；得到非甲基化产物， 且无甲基化产物判定该例标本为非甲基化；既未获得甲基化产物也未获得非甲基 化产物则标志本次实验失败。 统计学意义。 实验结果 率为21．1％，DApK基因甲基化率为42．1％，该基因甲基化与年龄相关，随着年龄 因甲基化率均显著低于胃癌组织和转移淋巴结中相应的基因甲基化率(均P o．01)。 织至少存在一种基因的甲基化，60．5％(23／38)的胃癌组织中这两个基因均呈甲 基化状态。其中，Ru噜x3基因的甲基化率为73．7％，并且该基因甲基化与癌灶 大小相关，癌灶长径大于5cm者发生甲基化的几率显著高于长径不超过于