中药壁虎抗肿瘤用的实验研究.pdfVIP

摘 要 论文题目：中药壁虎抗肿瘤作用的实验研究 专 业：肿瘤学 研 究 生：刘菲 指导教师：王建刚 教授 摘 要 目的 以中药壁虎为研究对象，首先进行急性毒性试验，了解其用药的安全 性；观察含中药壁虎的血清体外对人食管癌EC9706 、EC1 细胞系生长抑制作 用，中药壁虎体内对昆明种荷瘤小鼠（小鼠肉瘤 S180 ）实体瘤的抑瘤作用及对 荷瘤小鼠免疫系统的影响，探讨壁虎抗肿瘤作用机制；进一步研究了中药壁虎对 环磷酰胺（CTX ）治疗小鼠S180实体瘤的增效减毒作用。 方法 急性毒性试验应用中药急性毒性试验研究方法，测定小鼠灌胃给药的 半数致死量LD50及最大给药量。体外抑瘤实验应用中药血清药理学实验方法，含 中药壁虎血清体外作用于细胞，MTT法测定含不同浓度中药壁虎血清对食管癌 EC9706和EC1细胞系生长的抑制作用并按台盼蓝排染法计数活细胞数，绘制细 胞生长曲线。体内抑瘤实验建立移植性小鼠肉瘤S180实体瘤模型，荷瘤小鼠随 机分为 5 组，分别为实验组（高、中、低剂量壁虎粉）、空白对照组和阳性对 照组。然后用不同剂量壁虎粉制成的混悬液对实验组荷瘤小鼠灌胃，空白对照组 荷瘤小鼠给予等量生理盐水灌胃，阳性对照组腹腔注射环磷酰胺（CTX ），用药 14d后通过计算抑瘤率观察不同剂量的壁虎粉对小鼠肉瘤S180实体瘤的生长抑制 作用。壁虎对免疫系统影响方面，在测瘤重的同时测胸腺重、脾脏重，计算胸腺 指数、脾脏指数，并做腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞实验，计算吞噬率和吞噬指 数。抗肿瘤机制方面以小鼠肉瘤组织为研究对象，用SABC免疫组化法检测血管 内皮生长因子(VEGF) 、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 的蛋白表达，TUNEL方 法检测细胞凋亡率。增效减毒方面，建立移植性小鼠肉瘤S180实体瘤模型，随 机分为对照组、CTX组及壁虎粉高、中、低剂量与CTX联合用药组。观察药物对 肿瘤的抑制作用及对动物体重、免疫器官重量、白细胞数的影响。 结果 急性毒性试验无法测出壁虎粉的LD50 ，最大给药量实验小鼠未发现体 重减轻及其它异常反应，结果显示小鼠的最大耐受量超过人临床用量的108倍。 含中药壁虎的血清体外可抑制食管癌细胞的生长。体内中药壁虎可抑制小鼠肉瘤 S180生长，高、中、低剂量组抑瘤率分别为49.8% 、52.8%、43.1% ；对免疫器官 的影响不能提高荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数，对腹腔巨噬细胞不能增加其吞 I 摘要 噬率及吞噬指数。机制研究方面可降低肿瘤组织VEGF 、bFGF蛋白的表达，显著 提高凋亡指数。增效减毒方面，单用CTX组的抑瘤率达到35.6% , 同时小鼠增重 减慢，胸腺、脾脏也受到显著抑制，白细胞数明显减少；高、中、低剂量壁虎粉 与CTX合用3组的抑瘤率分别为63.9%( P0.01)、60.2%( P0.01)、53.3%，且各剂 量组小鼠体重及免疫器官重量、白细胞数均未见明显改变。 结论 中药壁虎常规临床用量安全可靠；中药壁虎体内外均有抗肿瘤活性； 其抗肿瘤的部分作用可能通过诱导肿瘤细胞的凋亡及抑制肿瘤血管的生成而实 现。中药壁虎对CTX治疗小鼠移植性肿瘤S180有减毒增效作用。 关 键 词：中药壁虎，食管癌细胞，小鼠肉瘤S180, 血管内皮生长因子(VEGF), 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) ，凋亡 论文类型：基础研究 II 摘要 Subject: Experimental study on anti-tumor action of Chinese medicine Gecko in vitro and vivo Specialty: Oncology Name: Liu Fei Supervisor: Professor Wang Jian-gang