第二章基因工程重组DNA导入受体细胞精要.pptVIP

脂质体介导转染的机制 阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹人内，形成DNA一脂复合体，也能被表面带负电荷的细胞膜吸附，再通过膜的融合或细胞的内吞作用，偶尔也通过直接渗透作用,将DNA传递进入细胞，形成包涵体或进入溶酶体,其中一小部分DNA能从包涵体内释放,并进入细胞质中,再进一步进入核内转录、表达。 利用脂质体介导法将外源DNA导入哺乳动物细胞具有实用潜力。 由于脂质体具有无毒、无免疫原性的特点，不仅可用于体外受体细胞的基因转化，而且可以在动物体内将基因转入肝细胞、血管内皮细胞等靶细胞或靶组织、靶器官位点，实现瞬间表达或稳定表达，成为基因治疗的一种有效工具。 ⑦基因枪法 基因枪法(又称粒子轰击法) 用高压气体加速把粘有DNA的细微金粉(或钨粉颗粒)打向细胞，穿过细胞壁、细胞膜、细胞质等层层构造到达细胞核，完成基因转移的方法 基因枪法适用于动植物组织或细胞、胚胎、细菌及小动物等。用这种方法，已将DNA先后送人酵母的线粒体和核、衣藻的叶绿体和核、洋葱的表皮细胞以及玉米悬浮细胞中。 基因枪法特点：快速、简便、安全、高效。 * * * * 本章重点掌握的内容 概念:受体细胞、电穿孔法、共转化、基因枪法、感受态细胞、转化、转染、磷酸钙-DNA共沉淀法、微注射技术。 选择受体细胞的基本原则 氯化钙转化法的基本原理 脂质体介导法及其转染的机制 常用的基因导