pten对胰岛抵抗的骨骼肌细胞调亡的影响及吡格列酮的干预研究.pdf

·中文论著摘要· PTEN基因对胰岛素抵抗的骨骼肌细胞凋亡的影响及 吡格列酮的干预研究 刖 罱 2型糖尿病的主要发病机制为胰岛素抵抗。胰岛素抵抗主要发生在受体后信 号传导障碍。PI．3K／PKB／AKt通路为胰岛素信号的主要传导通路，发生胰岛素抵 抗时，该通路活性是降低的。该通路也是促进细胞增殖、生长、存活的主要通路 【11。 andtension 第10号染色体缺失并与张力蛋白同源的磷酸酶(phosphatase deletedoncllromosome homolog ten，PTEN)参与P13．K通路已被证明有胰岛素信 PTEN／P13K／Akt构成一个重要途径，调节多种生物过程，如细胞凋亡，代谢，细 胞增殖和细胞生长【31。有研究发现，细胞内PTEN激活，可抑制AKt活性和诱导 细胞凋亡【41。 要作用机理为激活脂肪、骨骼肌和肝脏等胰岛素作用组织的过氧化物酶体增殖物 激活受体7(PPAR-7)，增加靶细胞对胰岛素的敏感性，降低胰岛素抵抗。PTEN启 过与这两个结合位点结合促进PTEN的表达【51。本研究观察吡格列酮干预的胰岛 素抵抗大鼠骨骼肌细胞PTEN和Akt磷酸化蛋白的表达和细胞凋亡。从而探讨 PTEN与胰岛素抵抗和细胞凋亡之间关系及其药物作用机制。 材料与方法 大鼠骨骼肌细胞(L6细胞系) DMEM培养液 棕榈酸 胰蛋白酶 优质胎牛血清 吡格列酮片 生物合成人胰岛素R 葡萄糖检测试剂盒 兔抗鼠PTEN及其磷酸化多克隆抗体及Akt磷酸化抗体 辣根酶标记的二抗 抗鼠Ij-actin Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒 二氧化碳培养箱 倒置显微镜 超低温冷冻冰箱 Western blotting全套设备 ECL成像仪 Prism 5软件 GraphPad 流式细胞仪 传代培养大鼠骨骼肌细胞，棕榈酸作用于细胞制备胰岛素抵抗模型，吡格列 酮作用于胰岛素抵抗模型的细胞进行药物干预，给予胰岛素刺激15min。设立正 组)。Western 细胞仪检测各组细胞凋亡率。 结 果 1、胰岛素抵抗组与正常细胞组比较PTEN、PTEN磷酸化的蛋白表达增加， p-AKt蛋白表达减少。 2、吡格列酮作用于胰岛素抵抗组细胞进一步增加PTEN、PTEN磷酸化蛋白表 达，p-AKt蛋白表达增加。 3、胰岛素抵抗组与正常组比较凋亡明显增多，吡格列酮作用于胰岛素抵抗组 进一步加重细胞凋亡。 结论 1、胰岛素抵抗骨骼肌细胞PTEN及其磷酸化表达增加，影响细胞凋亡。 2、PTEN基因可通过抑fl刘AKt磷酸化参与胰岛素抵抗的发生。 3、吡格列酮可增力nAkt磷酸化的表达，激活P13K／PKB／Akt通路改善胰岛素抵抗。 4、吡格列酮可增加胰岛素抵抗骨骼肌细胞的凋亡，其作用机制可能与上调 2 PTEN的表达有关。但这样上调可能不是通过P13K／PKB／Akt通路。 关键词 胰岛素抵抗；PTEN；Akt；吡格列酮；细胞凋亡 英文论著摘要 PTENinsulinresistanceinskeletal Influenceof on musclecell and intervention apoptosispioglitazone study