sept4、tkt4基因与特发性弱精子症关系的研究.pdf

摘要 SEPT4，TEKT4基因与特发性弱精子症关系的研究 研究生：冯晓霞 导师：李玉山 专业：I临床检验诊断学 郑州大学第三临床学院 河南 郑州450052 摘要 背景与目的 近几十年，全世界范围内育龄男性的精液质量都存在着下降趋势，男性不 育已是全世界面临的重要问题，而男性精液质量的下降主要体现在指标精子活 动力低下。精子活力是指精子的前向运动能力，它是精子穿透宫颈粘液，到达 受精部位，穿透放射冠和透明带，进入卵细胞的胞浆，完成受精全过程的重要 Health 条件。世界卫生组织(World 成男性低生育力和不育的主要原因之一。据报道【1l，大约24％的低生育力男性是 由于AZS引起的，另外55％的低生育力男性患者合并精液异常、精子活力低下、 精子形态异常。引起弱精子症的机制也很复杂，主要涉及精子能量代谢的异常、 信号传导通路的异常以及精子运动结构的异常等。 由于精子的运动主要是靠精子鞭毛的摆动实现的，因此分析精子鞭毛的结 构特征并探讨弱精子症的病因及其发生机制，为低生育男性提供有效合理的临 床治疗策略尤为重要。精子鞭毛是精子的主要组成部分之一，主要由轴丝、外周 致密纤维(outerdensefibers，ODFs)和线粒体鞘(mitochondrialsheath，MS) 等组成。目前研究发现，大约有250多种精子鞭毛轴丝及其附属结构的基因参 与精子运动这一生理过程，它们的突变或表达异常均可引起精子鞭毛结构和功 能的紊乱，导致精子运动障碍和活力低下12引。 摘要 为更深入地了解AZS的发生机制，本研究采用逆转录．多聚酶链式反应 TEKT4与特发性弱精子症发生机制的关系，从而为临床对特发性弱精子症的可 行性诊断和治疗提供可靠的实验基础和理论依据。 材料与方法 1研究对象 月河南省人类精子库合格的供精志愿者，精子密度60x106／ml，精子活力(a+b) 级≥60％；32份特发性弱精子症患者(年龄20-38岁)精液标本来自于同期郑州 大学第三附属医院生殖医学中心男科门诊的患者，精子密度20x106／ml，精子活 力(a+b)级50％，分别组成为正常男性组和弱精子症组。 2方法 2．1 RT．PCR 采用RT．PCR方法，检测SEPT4mRNA和TEKT4mRNA在两组精子中的表 达。 2．2 Western印迹 、I 达o 2．3免疫细胞化学 采用免疫细胞化学技术，检测SEPT4蛋自在两组精子中的定位及表达。 3统计处理 采用SPSSl7．0软件进行统计学分析，数据以xxs表示。弱精子症组和正常 男性组SEPT4、TEKT4表达之间的比较采用两独立样本f．检验进行分析；检验 水准a=0．05。 ll 摘要 结果 1 两组研究对象精子中SEPT4蛋白的定位与表达 SEPT4蛋白在精子中定位于精子鞭毛的环结构，并且与正常男性组相比， 特发性弱精子症患者精子中SEPT4蛋白表达量的差异具有显著意义(f=3．452， P=0．001)。 mRNA的表达 2两组研究对象精子中SEPT4 mRNA表达量与正常男性组相比显著降低，差异 弱精子症组精子中SEPT4 具有显著意义(f=3．521，P=0．001)。 3两组研究对象精子中SEPT4蛋白的表达 弱精子症组精子中SEPT4蛋白的表达水平与正常男性组相比显著降低，差 异具有显著意义(t--5．872，P=0．001)。 mRNA的表达 4两组研究对象精子中TEKT4 TEKT4 mRNA在弱精子症组精子中的表达量与正常男性组相比显著降低 (f=4．325，P=0．001)。 5两组研究对象精子中TEKT4蛋白的表达