sirt3对ag ⅱ介导的心肌肥厚中心脏代谢的作用及机制研究.pdf

目录 摘要………………………………………………………………………………………5 Abstract．．．．…．．．．．．．．………．．．．……．．．．．…………．．…………．………．……………．………．．…………．．．．．．……6 刖舌……………………………………………………………………………………………………………………8前言………………………………………………………………………………………8 1． 心衰是威胁人类健康的重要公共问题……………………………………………．8 2． 心肌肥厚是心衰的病理生理基础…………………………………………………．8 3． 心肌能量代谢紊乱是心肌肥厚的重要特征………………………………………．9 3．1 心脏脂肪酸代谢………………………………………………………………一9 3．2 心脏糖代谢……………………………………………………………………10 4． Sirt3的功能提示它可能与心肌能量代谢有关…………………………………．．10 4．1 III类组蛋白去乙酰化酶Sirtuins的特征……………………………………．10 4．2 Sirt3的表达与疾病相关的刺激有关…………………………………………11 4．3 Sirt3对心肌肥厚的作用………………………………………………………11 5． Sirt3对心肌肥厚时心肌代谢的作用及其分子机制是本研究的重点…………．．12 实验材料………………………………………………………………………………．．13 1．实验用动物及饲料…………………………………………………………………13 2．菌株与质粒…………………………………………………………………………13 3．其他主要试剂………………………………………………………………………13 4．主要仪器设备………………………………………………………………………13 实验方法………………………………………………………………………………．．14 1． Sirt3基因敲除小鼠的繁殖与鉴定………………………………………………．．14 1．1 PCR鉴定基因敲除小鼠………………………………………………………14 1．2 Sirt3基因敲除小鼠的繁殖……………………………………………………14 2． AnglI诱导的心肌肥厚模型的建立………………………………………………14 2．1 手术操作流程：………………………………………………………………14 2．2 心体比测定：………………………………………………………………………………………．15 3． 实时定量RT—PCR…………………………………………………………………15 3．1 RNA的提取……………………………………………………………………15 ， 万方数据 3．2 逆转录PCR(RT．PCR)……………………………………………………．．15 4． 8 大鼠H9C2心肌细胞的培养和药物处理…………………………………………1 4．1 大鼠H9C2心肌细胞的传代培养……………………………………………．18 4．2 8 H9C2心肌细胞的冻存和复苏………………………………………………．．1 5． 8 II处理……………………………………………．．1 质粒构建和转染和细胞Ang 5．1 8 转染用质粒DNA的大量制备………………………………………………．1 5．2 非脂质体转染试剂转染细胞…………………………