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中山大学硕士论文 摘要 SUMS0382申克孢子丝菌生物学特性及免疫正常动物 模型建立的初步研究 专 业： 皮肤病与性病学 学位申请人： 薛汝增 指导老师：黄怀球副主任医师 孢子丝菌病是一种皮肤、皮下组织及其附近淋巴系统的亚急性或慢性真菌感 schenckii，简称 染，有时可波及各脏器。其致病菌申克孢子丝菌(Sporothrix schenckiO广泛存在于自然界，尤其是热带和亚热带地区，中国亦为高发地区。 S．schenckii的形态特征是与其它双相型真菌鉴别的重要依据，同时与其致病 性关系密切。其在25℃生长状态为菌丝相，表现为淡褐色至深褐色或黑色菌落， 有皱褶或沟纹，可见灰白色短绒毛状菌丝，镜下可见纤细分支分隔菌丝，生孢子 梗位于菌丝两侧直角长出，呈梅花朵样或“套袖”状排列；37℃为酵母相，表 现为白色至灰黄色酵母样菌落，镜下可见圆形、长形或者梭形孢子，有出芽。双 相型转化是S．schenckii的重要特征之一，转化条件较复杂，存在菌株特异性，并 且与菌株的毒力相关。Sschenckii侵入宿主后，通过一系列的形态学改变来适应 宿主的内环境，造成组织损伤，抵抗宿主免疫杀伤。目前大多数学者认为酵母相 是Sschenckif的致病形态。 孢子丝菌病呈慢性病程，发病部位皮肤组织纤维化导致其治疗周期长，费用 高，而且已有对两性霉素B治疗失败的报道，亦有对伊曲康唑MIC值较高的报 道，因此有必要进行体外药敏试验及耐药菌株的临床监测。《美国传染病协会 2007版孢子丝菌病临床治疗指南》推荐，伊曲康唑作为非系统性孢子丝菌病的 首选单独治疗药物，很多学者亦尝试了联合治疗，并取得一定疗效。而与之相关 的体外药敏试验仍处于探索阶段，由于影响因素较多，哪一种生长形态的药敏试 验结果更为准确可靠、并用以指导该病治疗尚存争议。目前尚无S．schenckii对伊 中山大学硕士论文 摘要 曲康唑耐药的报道，亦无相关药敏试验耐药标准的报道，对其耐药机制需进一步 探讨。 尽管很多学者通过建立动物模型的方式，对Sschenckii的致病性、宿主免 疫反应及治疗方面进行了探讨，但迄今为止仍未有明确的阐述。动物模型的建立 是由宿主和受试菌株共同决定的，影响因素较多，既往文献报道动物模型多是在 免疫抑制基础上建立的，既不能反应疾病的自然进程，也不能反应宿主的正常免 疫作用。因此建立理想的孢子丝菌菌病动物模型，模拟自然发病过程，对该疾病 发病机制的阐明及治疗药物的疗效评价具有重要意义。本课题拟通过对分离自l 例伊曲康唑治疗失败的孢子丝菌病患者的临床菌株SUMS0382的生物学特性及 所建立的相应慢性皮肤感染动物模型进行研究，有助于阐述S．schenckii的致病 性。 第一部分SUMS0382申克孢子丝菌的生物学特性研究 目的 探讨SUMS0382申克孢子丝菌的酵母相转化条件、生长抑制温度及体外药敏 试验，进一步明确其真菌生物学特性。 方法 l、酵母相转化。将实验菌株传代活化2次后，超净工作台内，挑取生长良好的 菌落团块，采用划线接种法，接种于BHIA+5％羊血斜面试管和BHIA+o．5％GS 斜面试管，各2管，置C02恒温温箱35C培养。必要时连续传代，直至转化 成功，获得灰白色酵母型菌落。 2、温度生长抑制试验。将酵母相实验菌株，采用划线接种法，接种于SDA平板、 PDA平板、 个，分别置35℃、36C、37C和38CC02恒温温箱培养14d，观察各菌株 生长情况，记录各实验菌株的停止生长温度。 3、伊曲康唑和特比萘芬体外联合药敏试验。活化菌株，分别制备菌丝相和酵母 相菌悬液，菌丝相浓度调整至5×104 CFU／mi(2倍终浓度)，酵母相调整至2．5 x103 CFU，ml(2倍终浓度)；采用微量液基稀释法加样制板后，菌丝相置25 ℃，酵母相置35℃孵育，第5d观察结果。结果判断标准为各药的MIC终点