toll样受体在急性胰腺炎相关性肠道损伤中的作用.pdf

中文摘要 Toll样受体4在急性胰腺炎相关性肠道损伤 中的作用 摘 要 急性胰腺炎(acute acute 症之一，特别是重症急性胰腺炎(severe pancreatitis， SAP)来势凶猛，病程进展快，合并感染的病死率可高达25％。 大量研究显示，肠道黏膜屏障损伤及其介导的病理改变在其 发病过程中起到了关键的作用。AP时肠道屏障功能受到损 害会直接导致细菌和内毒移位，引起肠源性感染和内毒素血 症，并进一步激发全身炎症反应综合征(systemic． inflammatoryresponse disfunction MODS)。 综合征(multipleorgan syndrome， Toll样受体(Toll—like 类受体，它在炎症、免疫、病源体识别中都起着十分重要的 作用。其中Toll样受体4(Toll．1ike4，TLR4)作为 receptor LPS受体可识别来自G．细菌的LPS，其与急性胰腺炎相关肠 道损伤的关联性已得到证实，并逐渐引起重视。已知TLR4 是发现最早的TLRs亚型之一，近十几年来对其研究最多， 其信号传导通路也最为明确，某种因素激活TLR4后，通过 一系列信号传导，产生炎症放大效应。 径主要介导核因子．r．B(NF．r．B)活化、细胞因子的产生。研 究表明急性胰腺炎时肠道微血管内皮细胞和白细胞内的黏 中文摘要 膜固有层TLR4的表达增多。马继民等研究发现急性胰腺炎 时肠黏膜TLR4的表达水平与肠黏膜通透性指数明显相关， 与肠黏膜的病理学改变也呈相关性。目前已经研制出TLR4 身上，发现其能减轻溃疡性结肠炎的病情。因此我们也推测 将TLR4mAb注入急性胰腺炎大鼠的腹腔内也会减轻胰腺炎 对肠黏膜的损伤。 目的： 讨TLR4在急性胰腺炎相关性肠道损伤中的作用，并探讨 TLR4单克隆抗体对急性胰腺炎肠黏膜损伤的治疗效果。 方法： l动物模型的制备 选取雄性大鼠，以10％水合氯醛腹腔注射麻醉，取上腹 正中作切口进入腹腔，用4号加工钝头头皮静脉针头于十二 指肠乳头附近逆行插入胰胆管，以0．2ml／min速度注入5％牛 磺胆酸钠(O．1ml／1009)，推药后捏闭胰胆管入十二指肠处， 观察3min，剪除结扎线，关腹。 2实验分组 注射，剂量为50}tg／只。 3生化指标测定 中文摘要 取血清样本，采用全自动血清生化分析仪检测血清淀粉 酶、脂肪酶活性，由河北医科大学第二医院生化室协助测定。 4胰腺、肠道组织病理学 采用石蜡切片，HE染色。 5 DAO活力测定 取肠组织制成组织匀浆，采用1995年黎君友等改良的 分光光度法，检测肠组织匀浆二胺氧化酶(DAO)活性。 6肠组织TNF．a、IL．6的测定 取肠组织制成匀浆，严格按照大鼠放射免疫试剂盒说明 书要求检测。 5min。 脱蜡至水，抗原热修复后，用3％过氧化氢孵育l 封闭一抗4。C过夜，阴性对照用PBS代替一抗。先后滴加二 染后封片。以细胞浆内呈现黄褐色颗粒为阳性表达，并进行 免疫组化评分。 8 westem bloting法测定 彻底粉碎，加入lml细胞裂解液，充分裂解，提取TLR4膜 10099与上样缓冲液充分混合，置于SDS变性聚丙烯酰胺凝 胶电泳，转移至NC膜，以5％的脱脂奶粉封闭，一抗(1： 250)4C孵育过夜，以相应的二抗室温下孵育2h，抗体检测 按SantaCruz公司试剂盒说明书进行。 结果： 1血清淀粉酶、脂肪酶变化 中文摘要 血清脂肪