upar反义ra表达质粒对大鼠ra滑膜ecm影响的初步研究.pdf

摘 要 旦盟： 探讨反义uPAR／pcDNA3．1(．)真核表达质粒对胶原型大鼠滑膜细胞外基质的影响。 挝料生方法： 抽提pcDNA3．1(一)质粒及反义uPAR／pcDNA3．1(一)质粒。 2．Wistar雌性大鼠50只，随机分为5组，每组10只，为正常对照组、造模对照组、 生理盐水治疗组、空质粒治疗组、重组质粒治疗。正常对照组不做任何处理，其余4组 建立II型胶原诱导的大鼠类风湿性关节炎(CIA)模型，15日后，生理盐水治疗组、空 质粒治疗组、重组质粒治疗组，左踝关节内分别注射生理盐水、pcDNA3．1(．)质粒及反 义uPAR／pcDNA3．1(一)质粒注射各50ul。 3．结果观察：观察大鼠的一般情况、关节炎指数，病理变化及免疫组化法检测踝关节滑 膜uPAR、MMP．3的表达。 缱墨1 1． Marker5400 回收质粒DNA抽提质粒后1％琼脂糖凝胶电泳，在DNA bp附近可见 明显条带，与目的片段大小相符，用全自动紫外分光光度计作浓度、纯度测定，经测定 质粒浓度51 OD=260／280，在1．9．2．0之间。 Ong／ul、500ng／ul、质粒DNA 2． 随着CIA免疫时间的延长，造模对照组、生理盐水治疗组、空质粒治疗组关节炎指 数评分渐增加迅速，而重组质粒治疗组关节炎指数评分增加缓慢；与J下常对照组比较， 模型组大鼠滑膜，滑膜轻度增厚，滑膜新生血管开始增多，大量炎性细胞浸润、增生。 3．免疫组化显示：uPAR的表达：正常组大鼠滑膜组织中无表达，模型对照组、生理盐 水组及空质粒组之间无差异(pO．05)，模型对照组、生理盐水组、空质粒组与重组质 粒治疗组之间有显著差异(pO．01)；MMP．3的表达：正常大鼠滑膜组织中无表达，，模 型对照组、生理盐水组及空质粒组之间无差异(po．05)，模型对照组与重组质粒治疗 PO．01)。 结途! 1．uPAR／pcDNA3．1(．)表达质粒能抑制滑膜组织中uPAR的表达。 降解，为类风湿关节炎的治疗提供理论依据。 关键词： 质粒；胶原型大鼠；基因治疗；细胞外基质；尿激酶型纤溶酶原激活剂受体 The ofuPARAntisenseRNA Plasmidtothe PrimaryStudy Expressing ExtracellularMatrixof arthritisinRats Synoviai collagen—induced Abstract Object：． To theeffectoftheuPAR RNA tothe Antisense extracellular investigate expressingplasmid synovial matrixof arthritisinrats collagen·induced Methods： 1． Extraction thetraditionalalkalinemethodtoisolate DNAfromthebacterial plasmid：Using plasmid solutions． femaleWistar 2．50 ratsweredividedinto control control equally：normalgroup，model 59roups group