skp2 sina对hl-60a细胞周期及耐药性的影响.pdf

sKP2 siRNA对HL-60／A细胞周期及耐药性的影响 中文摘要 SKP2 siRNA对HL．60／A细胞周期及耐药性的影响 中山大学附属第二医院血液内科 硕士研究生 肖洁 导 师 尹松梅教授 第一部分SKP2、P27kipl在HL-60和HL．60／A中的表达和意义 第二部分RNAi抑制SKP2基因表达对HL．60／A细胞周期和耐药性的影响 中文摘要 背景与目的 急性白血病是血液肿瘤中最常见的疾病之一。随着生命科学研究的不断发 展，治疗白血病的方法不断进展。药物的化疗，分子靶向治疗，造血干细胞移植 等联合治疗使治疗效果不断提高。目前造血干细胞移植被认为是治愈急性白血病 唯一有效的方法，但是存在HLA相合配型难及费用昂贵等问题，药物的化疗仍 是急性白血病治疗的主要手段。经标准的化疗方案治疗后约有21P,4的初发患者不 能获得完全缓解，有60％左右的患者在完全缓解后复发，白血病细胞的原发及继 发耐药是白血病化疗失败的主要原因之一。因此提高白血病细胞对化疗药物敏感 性是治愈急性自血病的关键。 正常细胞在内外因子的调节下有序的循着细胞周期不断分裂增生及凋亡， 保持动态平衡。肿瘤细胞的增殖平衡失调，细胞出现无限制的增殖和凋亡减慢。 细胞失控性增生对肿瘤的发生发展有重要的意义。S期激酶相关蛋白2(S．phase kinase．associated 2，SKP2)是一个与细胞周期调控密切相关的基因，属 protein SKP2siRNA对HL-60／A细胞周期及耐药性的影响 中文摘要 细胞周期于G0／G1期。SKF2、P27bpl通过影响白血病细胞的增殖、分化、凋亡 参与白血病疾病的进程和预后。 SKP2、P27。lpl与白血病耐药的研究尚存在争议。通过检测临床白血病患者 疗药物的敏感性、完全缓解率有关，SKP2高表达或P27kipl低表达的患者预后不 良，P27kivl的表达水平高，患者化疗的缓解率高。但细胞周期的停滞有可能使白 血病细胞对细胞周期依赖性的化疗药物更加不敏感。目前为止，有关降低癌基因 SKP2的表达影响白血病耐药的机制尚不明确。 本实验对敏感细胞株HL．60和耐药细胞株HL．60／A的细胞周期调控因子 预后的关系；设计合成具有良好沉默效应的SKP2siRNA，研究SKF2基因水平 药性的变化，初步探讨下调SKP2基因表达对白血病耐药的影响。 方法 第一部分，用药物毒性分析法检测HL．60及HL．60／A两种细胞对化疗药物 的敏感性，并用流式细胞仪检测两种细胞的细胞周期，采用RT-PCR和Western kipl、MRP blot方法检测两种细胞中SKP2、P27mRNA和蛋白的表达情况。 第二部分，针对SKP2 NucleofectorTM核酸转染仪对人HL．60／A细胞进行SKP2 siRNA及Cy3标记的阴 性siRNA转染，流式细胞仪检测转染效率。用RT-PCR和Westernblot方法检测 默后P27“P1、MRP的表达情况。检测转染后细胞在不同浓度化疗药物的作用下 concentration 细胞的死亡，计算半数抑制浓度(inhibitory 50，IC50)，比较转染前 后细胞对化疗药物敏感性的变化．观察其变化是否通过MRP表达的下调起作用。 通过流式细胞仪检测转染后细胞的细胞周期分布，了解细胞周期与细胞耐药关 系。 结果 1 玎 SKP2 中文摘要 siRNA对HL-60IA细胞周期及耐药性的影响 分别为(O．58±0．06)％和(O．274-0．05)‰PO．Ol。MRPmRNA在HL-60／A