中性颗粒细胞自性凋亡相关mirna的鉴定及功能研究.pdf

中性粒细胞自发性凋亡相关miRNA的鉴定及功能研究 摘要 ㈣必 目的：中性粒细胞(polymorphonuclear 重要的炎症细胞，参与机体对病原微生物的防御，在人体非特异性免 疫反应起着重要的作用。中性粒细胞白骨髓释放至外周血循环后其生 命期限仅24～48h，一旦进入血液循环即启动自发性凋亡程序来维持其 数量的平衡和内环境的稳定，对炎症的发生、发展及转归起着重要的 作用。miRNA是一类非编码小砌蛆，长度约为18～24个核苷酸，它通 发挥负性调节作用。本研究通过检测自发性凋亡进程中中性粒细胞差 异表达的miRNA，探讨miRNA在中性粒细胞自发性凋亡过程中的作用， 为中性粒细胞自发性凋亡机制的研究提供新思路，也为炎症性疾病的 诊断及治疗方法的选择提供新的依据。方法： (1)分离人外周静脉血 中性粒细胞，鉴定其活力与纯度，并分组培养不同的时间。对照组： 新鲜分离(oh)中性粒细胞；实验组：分离后分别培养12h和24h的中 (3)应用数字基 性粒细胞； (2)分别收集各组细胞并提取总RNA； 因表达谱技术(DGE)检测和筛选Oh和24h中性粒细胞差异表达的 miI斟A芯片 训刚A，差异超过2倍为有意义结果；(4)应用A毋恤etrix 检测和筛选对照组和实验组差异表达的miRNA，差异超过2倍为有意义 结果； miR-487b、miR．4417、miR_432)进行Nor山emB10t检测，验证芯片结 果的可靠性； 据库的结果取交集；得到的结果再与DGE结果相结合，筛选二者的共 同结果； (7)将从靶基因预测和DGE共同的结果中选取2个与细胞凋 Blot进 行表达检测，确定miI矾A、相关靶基因与中性粒细胞自发性凋亡的相 关性。结果： (1)DGE共筛选出差异表达的基因l，317个，其中包含多 个与细胞凋亡相关的基因； (2)miRNA芯片结果：以0h组为对照， 12 h组表达上调的有 h组表达上调的mi砌蛆有21个，下调的有21个，24 41个，下调的有22个，其中12h和24h组共同上调的有13个，共同下调 的有11个； (3)Nomlem 表达上调，miR_4417表达下调，结果与芯片结果一致；(4)生物信息 可能为miR-4539的靶基因； 果一致； (6)Westem 降低。结论： (1)获得了中性粒细胞自发性凋亡过程中的mRNA差异 表达谱；(2)获得了中性粒细胞自发性凋亡过程中的miRNA差异表达 谱，且结果可靠； 凋亡； 性粒细胞自发性凋亡； 调节中性粒细胞自发性凋亡。 mil04539；MCLl；PKCD Identificationandfunctionalon m迁tNAassociatedwith study of spontaneousapoptosisneutrophils infl锄e— imponant foundint11ehman inhost mato巧cells body．Neutrophilsp缸icipate defense a11dservean againstpamogenic