中枢神经系统损对内皮性脂酶表达影响的体内外研究.pdf

中枢神经系统损伤对内皮性脂酶表达影响的体内外研究 中文摘要 中枢神经系统损伤对内皮性脂酶表达影响的体内外研究 中文摘要 nervous 中枢神经系统(central system，CNS)损伤后轴突再生困难，一直是临床神 经疾病治疗的难点，长期以来，人们通过各种途径寻找其原因并试图攻克这一难关。 近年来的研究表明，CNS受损后轴突不能再生可能有以下几个方面的原因：成年神经 元损伤后本身的再生能力下降；胶质瘢痕的形成；神经营养因子的缺乏及轴突再生抑 制蛋白的作用等。对于CNS损伤后功能的修复，目前尚无有效方法，主要是依靠其自 身的修复能力，临床治疗只是一些辅助措施，但效果均不尽如人意。 内皮性脂酶是近年来发现的甘油三酯脂酶基因家族的新成员。1999年，Hirata从 UmbilicalVeinEndothdial 人脐静脉内皮细胞(Human Cells，nUVEC)中分离出一种新 的cDNA片段，这种片段似乎是编码一种类似脂蛋白脂酶(1ipoproteinlipase，LPL)的新 oflow 基因。同年，Jaye等从氧化型低密度脂蛋EI(oxidationdensRy 刺激下的THP一1(从一位女性急性单核细胞白血病患者获得的人单核细胞系)细胞中提 取mRNA，然后以其为模板合成cDNA并对其进行分析，发现一种新的基因。这种基 因核苷酸序列与LPL有44％相同，与肝脂酶(hepaticlipase，HL)有41％的相同，与胰脂 酶(pancreas 码的产物与LPL、HL和PL来源于一个共同的脂酶祖先基因，因此被确定为甘油三酯 脂酶基因家族的新成员，并命名为内皮性脂酶(endothelial lipase，EL)，相应的基因依 照这个基因家族的基因命名法被命名为LIPG。目前，国外有关的研究正在进行，尚 有许多需要解决的问题，国内未见相关研究报道。那么，与LPL、PL同源的内皮性脂 酶具有什么作用? 目的建立CNS体内、外损伤模型，检测CNs损伤后内皮性脂酶表达水平的变化 情况，以探究内皮性脂酶在CNS损伤后轴突再生与修复中的作用。 方法取新生SD大鼠fe0-P3)脑皮质，进行混合胶质细胞的原代培养，根据各种胶 质细胞黏附性及生长时间的差异，通过机械振荡法和差速贴壁法获得纯化的星形胶质 中枢神经系统损伤对内皮性脂酶表达影响的体内外研究 中文摘要 断损伤模型，取损伤后不同时间点(12H、l天、3天、5天、1周、2周、4周)、假手术 blot检澳JCNS损伤后内皮 组(Cont)及正常(N)的脊髓组织；免疫组织化学标记和western 性脂酶和凋亡促进因子caspase-3的表达水平。 结果星形胶质细胞在机械性损伤后内皮性脂酶的表达增高，于6H处达到峰值， 现表达增高并达峰值，与对照组比较差异具有显著性(PO．01)，其后表达水平虽然有 所下降，但至损伤后48H仍处于高表达水平。脊髓半横断损伤后内皮性脂酶于3天开 始增高，第5天达高峰，与对照组比较差异具有显著性(PO．01)，随后表达渐趋下降； (P0．01)，随后表达下降渐趋正常水平。 结论脊髓损伤及星形胶质细胞机械性损伤后均较早地出现凋亡现象；内皮性脂 酶在中枢神经系统损伤后轴突再生与修复过程中可能起重要作用。 关键词星形胶质细胞；内皮性脂酶；中枢神经系统损伤；再生；修复；caspase-3； 细胞凋亡 作 者：赵爱琴 指导教师：夏春林教授 Ⅱ 中枢神经系统损伤对内皮性脂酶表达影响的体内外研究