人ngal原核达及多克隆抗体的制备.pdf

摘要 摘要 研究目的： 人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil 现的。以往的研究表明NGAL与炎症、胚胎发育、免疫应答、趋化作用、信号 转导以及多种肿瘤的发生与发展等过程密切相关。NGAL在乳腺癌、食管癌、 结直肠癌、胃癌、慢性粒细胞性白血病等细胞系中均过表达，并在癌细胞的浸 润与不良分化中发挥重要的作用。进一步研究证实，NGAL是多种原因引起的 肾损伤的一个保护因素并且由于分子量小，对蛋白酶有天然的抗性，NGAL在 肾脏损伤后很快聚积，在尿液中出现早，可作为急性肾衰的诊断标记物，是有 效评价急性肾衰临床治疗效果及预后的良好指标。本文构建NGAL原核表达载 纯化后作为抗原，免疫动物，制备多克隆抗体，为进一步阐明NGAL生物学功 能奠定基础。 研究方法： 1构建NGAL原核表达载体 I双酶切，回 为模板行PCR，再将扩增片段与载体pET28a同时用HindIII和BamH 收后将目的片段连接入原核表达载体pET28a中，将NGAL原核表达质粒转化 EcoliRosetta DE3、筛选阳性茵落、提取质粒后双酶切、载体测序引