中国苯丙酮尿症ah基因突变、表达与基因诊断方法的建立.pdfVIP

张志博士论文 中国苯丙酮屎症基因突变、表达与基因诊断方法的建立 中国苯丙酮尿症PAH基因突变、表达与基 因诊断方法的建立 专 业：人体解剖与组织胚胎学 博士研究生：张靛 导 师：何蕴韶教授 中山大学基础医学院人体解剖学教研室 摘 要 hydmxyla∞．PAH) 遗传病。其中98％～99％是由于苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine 基因突变导致肝脏苯丙氨酸羟化酶活性降低，1％～2％是由于苯丙氨酸羟化酶的 辅酶一四氢生物喋岭缺乏。导致苯丙氨酸不能正常转化为酪氨酸，从而在体内异 常蓄积而致病。PKU临床表现主要为智能低下、癞痫发作等。PKU是法国医生 于目前PKU的治疗依靠长期饮食控制，给社会和家庭带来沉重的精神和经济负 担。PKU预后与接受治疗的早晚有关，因此早期诊断对PKU的预后有重要影响。 目前PKU己成为中华人民共和国母婴保健法实旌办法规定的所有新生儿必 须接受筛查的3种遗传病之一。我国新生儿PKU筛查是使用Guthrie细菌抑制法， 此法准确性不高，且易受采血时间及是否服用抗生素的影响而易出现假阴性等缺 点。因此探索新的基因诊断方法具有重要社会意义。 为了探索PKU的基因诊断，世界各地实验室一直在开展以基因突变和突变功 能分析为中心的PKu分子遗传学研究。总结PKU的分子遗传学研究大体可以分为 三个阶段，即前基因组时代、基因组时代和后基因组时代。从1934年医学界第 张志博士论文 中国苯丙酮屎症基因突变、表达与基因诊断方法的建立 一次认识PKU到PKU致病基因(PAH)克隆前的研究属于前基因组时代，主要从事 PKU的生化代谢和生化诊断领域的研究，确立-PKU的Guthrie细菌抑制筛查方法， 并认识至rJPKU发病的生化基础是肝脏苯丙氨酸代谢障碍，并通过控制饮食中苯丙 氨酸的摄入治疗PKU获得成功。 位于染色体12q22～q24．1区域。这项研究具有划时代的历史意义，为PKU的 分子遗传学研究奠定了基础，也为PKU的基因诊断、产前诊断和携带者检测开 辟了道路，标志着PKU研究进入基因组时代。1985年发现PAH基因的阅读框 为1 X103。1 986年发现 353bp，编码451个氨基酸残基，相对分子质量约为51 了人类PAH基因上的第一个突变。1991年首次阐述PKU基因型和表现型之间 的关系。1996年成立PKU突变分析协会，综合世界范围内各个实验室发现的 PAH基因新突变建立第一个PKU基因突变的数据库。近年来有关PAH基因突 变分析已经开始为临床诊断服务。 1997年以后，PKU的分子遗传学研究热点逐渐转移为通过PAH基因体外表 达来研究基因突变的功能，标志着PKU的研究进入后基因组时代，主要研究基因 突变对PAH蛋白三维结构以及对蛋白质功能的影响。基因突变的体外表达研究可 以用来鉴定基因突变是否是PKU的致病突变，正确区分突变的性质、评价突变对 蛋白质功能的影响程度，明确突变对PKU发病的分子机制。研究表明大部分基因 突变可以正确预测临床表型，即揭示基因型和表现型之间的关系。有利于我们通 过分子模型来直观地理解蛋白质结构和功能之间的关系。 PKU分子遗传学研究成果推动了PKU基因诊断方法的发展。目前已经开展的 基因诊断方法主要有家系连锁分析和突变检测两大类，主要有以下几种方法。 short 1．聚合酶链反应一短串联重复序列(PcR tandem repeat，PC卜STR) 连锁分析此法应用基因连锁分析方法进行PKU家系分析，可有效地诊断具有 PKU先证者家族成员中症状前患者，但对于无先证者的散