抑制vegf表的锤头状核酶系统的建立与评估.pdf

抑制VECF表达的锤头状耘酶系统的建立与评估 中文摘要 血管内皮生长因子(VEGF)是肿瘤血管新生过程中的重要因子，是抗血管 新生的肿瘤基因治疗的重要靶点，本论文旨在建立和评估抑制血管内皮生长因子 表达的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)技术系统，探讨该系统在抗血管新 生的肿瘤基因治疗中可能的应用。 为了建立和评估抑制血管内皮生长因子表达的锤头状核酶技术系统，我们 运用了如下技术手段：1对VEGFl21基因mRNA序列进行二级结构分析，选择 载体系统和VEGF一荧光色素酶融合基因报告质粒；3，通过试管内切割实验等 方法评估核酶对于试管内转录得到的VEGFRNA切割有效性和效率；4，通过瞬 时共转染实验和稳定转染实验评估核酶在细胞内对于VEGFmRNA的切割效率； 5，通过构建缺陷型腺病毒导入系统评估核酶在细胞内对于mRNA的切割效果； 6，通过稳定表达核酶的细胞株的裸鼠成瘤实验评估抑制VEGF对于肿瘤形成和 生长的作用。 研究结果显示：1，设计和构建了对VEGFl21mRNA二级结构水平上的暴露 121 酶(1，3和4)可以有