神经生长因子对原始卵泡体外发育影响的实验研究.pdf

◇您苎H! 神经生长因子对人原始卵泡体外发育影响的实验研究 摘要 神经生长因子对人原始卵泡体外 发育影响的实验研究 中山大学附属第二医院妇产科 硕士研究生 魏春霞 导 师 张清学副教授 中文摘要 随着医学技术的进步，许多肿瘤、自身免疫病和骨髓移植患者得到了临床上 的治愈，但其卵巢功能由于化学或物理治疗而遭到了严重损害，对患者的生存质 量和生育能力造成严重影响。同时，越来越多的女性由于职业竞争压力的增大而 一再推迟生育年龄，给优生优育带来了隐患。如何充分利用生殖资源保存女性特 别是接受抗癌治疗患者的生育能力，解除职业女性的后顾之忧，是一个值得研究 的重要课题，具有广阔的应用前景。 由大量原始卵泡组成的卵泡库是雌性生殖资源储备库。这些处于静止状态的 原始卵泡会分批分化成发育的初级卵泡，但在雌性个体一生的生殖活动中，原始 卵泡库中能够成熟排卵的仅0．1％～O．2％，绝大多数卵泡在不同的发育阶段闭锁。 如果能够充分利用这部分卵泡，将为人们提供大量宝贵的人类卵子资源。 哺乳动物原始卵泡体外生长和成熟的能力在1996年由Eppig和0’Brien首先 证实，他们将小鼠原始卵泡在体外培养成熟，并经体外受精和胚胎移植后获得成 活后代，这为利用早期卵泡进行体外生长(IVG)、体外成熟(IVM)和体外受精(IVF) 获得成活后代以此保存女性生殖功能提供了可能。 原始卵泡是卵巢中卵子贮存的基本单位，在卵泡生长启动中，颗粒细胞的分 化和生长是原始卵泡生长启动的关键。目前我们对于原始卵泡向初级卵泡转化的 机制了解不多，通常认为卵泡发育是通过垂体促卵泡素(FSH)调控的，尽管初 级卵泡颗粒细胞中检测到FSH受体及其mRNA表达，但未发现原始卵泡上有FSH受 一I一 ◇￡之苎0 神经生长因子对人原始卵泡体外发育影响的实验研究 摘要 体，有实验显示分离卵泡或卵巢皮质在体外培养时原始卵泡可以在无性激素的条 件下转化为初级卵泡，推测这一过程是不依赖性激素的，FSH在原始卵泡直至晚 期窦前或早期窦状卵泡的发育过程中并不起决定性作用，卵泡发育的不同结局也 提示卵巢内存在其他的调节系统。 卵泡闭锁是卵母细胞通过一定的机制而湮没的过程，是卵泡生长过程中的必 要环节之一，卵泡闭锁的出现调整了生殖细胞的储备量，导致了两次生殖细胞储 备量的下调。卵泡闭锁本身可能是卵泡凋亡，几种促成活和几种促凋亡分子参与 了卵泡凋亡的发生，两类分子复杂的平衡调节决定了卵泡的最终命运，对这些分 子的进一步研究将有利于降低卵泡体外培养过程中的卵泡丢失，有助于对卵巢组 织中卵泡资源的充分利用和女性生殖能力的保存。 ‘ 近年来，人们在探索原始卵泡的活化机制及降低卵泡体外培养过程中卵泡闭 锁率的过程中发现，它可能受卵巢组织来源的许多生长因子的调控。许多生理代 谢的启动过程都是受神经信号调节的，依此类推，卵巢的神经营养因子也可能是 影响卵泡启动发育的重要因子，Hirshfield等研究大鼠胚胎，发现靠近卵巢门 的原始卵泡最先启动生长发育，更支持了这一观点，因为卵巢门是胎鼠卵巢最先 接受神经支配的部位，神经营养因子促进神经纤维的生长，原始卵泡在卵巢门暴 露于神经纤维释放的神经递质中，神经递质如血管活性肠肽(VlP，vasoactive intestinal 加KL基因的表达从而促进原始卵泡启动，因而推论神经营养因子如神经生长因 予(NGF，nerve growth neurotrophic 启动早期卵泡发育。 细胞内发现。N6F广泛存在于动物体内，是一种蛋白质，含三种亚基a、B、Y， 以a：9 Y：五个亚基组成(分子量140000)，B亚单位是NGF分子的生物功能活 性单位。 缺失的小鼠模型发现新生小鼠卵巢阳J质细胞数目明显减少，使用抗PCNA cellularnuclear (proliferating antigen，增殖细胞核抗原