神经营养因子受p75在戊四氮致痫大鼠海马神经元中的表达变化.pdfVIP

中文摘要 神经营养因子受体P75在戊四氮致痫大鼠海马神经 元中的表达变化 摘 要 目的：癫痫是以脑神经元过度放电导致反复、发作性和 短暂性的中枢神经系统功能失常为特征的慢性脑部疾病，其 发病机制不清。 癫痫可致脑损伤，细胞凋亡或称程序化细胞死亡启动一 系列复杂的蛋白酶级联反应，是癫痫致脑损伤的一条重要途 径。长时间癫痫发作后可出现脑内选择性的神经元凋亡坏死 建立癫痫持续状态大鼠模型来观察癫痫大鼠海马的组织学 Blot 以及免疫组织化学等方法观察其海马神经营养因子P75NTR 的表达变化，探讨癫痫发作后P75NTR介导的凋亡相关途径， 将有助于从分子水平上更有效的寻求癫痫的治疗靶点，为减 轻癫痫致脑损伤提供新途径。 00只， h光亮／黑暗条件、22℃～25℃环 实验起始质量200士209，12 境温度，分笼喂养。实验动物随机分为癫痫持续状态组(status control epilepticus，SE组)和对照组((normalgroup，NC组) 两个大组，每组又分为1，6，24，72小时四个亚组，每组 动物20只。SE各组大鼠应用生理盐水溶解的1％戊四氮溶 液，首先按40 中文摘要 分为6级。0级：无任何反应；I级：胡须动、面肌抽动； II级：点头、咀嚼或湿狗样抖动(wet dog 级：一侧前肢抬起、阵挛；Ⅳ级：站立伴有双侧前肢阵挛； V级：跌倒、全身强直阵挛性发作。完全点燃的标准是获得 连续3次Ⅳ级或以上的运动惊厥，且重复的SE发作达30min 以上。对照组注射同等容量的生理盐水。然后观察大鼠行为 学改变，各组大鼠均取4只分别选取1，6，24，72h四个时 间点观察其组织学变化，并运用反转录多聚酶链反应fRT- Western mRNA PCR)矛D Blot方法分别测定大鼠海马P75NTR 和蛋白的水平变化，用免疫组织化学方法观察P75NTR在海 马CAl区、CA3区的表达情况。 结果： 6只应用 1动物模型制备 SE组大鼠共80只，1 PTZ 40mg／kg、48只60mg／kg、11只70mg／kg、5只80mg／kg 即开始出现惊厥，主要表现为节律性缩头、肌阵挛。随着PTZ 每10min注射一次，很快出现四肢抽搐，进入全面性强直发 作阶段的大鼠失去姿势控制，前、后肢伸肌强烈收缩，并伴 有呼吸抑制，口周发绀，眼球充血，持续数分钟不等。强直 阶段过后出现全面性强直．阵挛发作。80％动物达到Racine min以上。 分级Ⅳ～V级的点燃标准，大鼠SE持续时间在30 27只大鼠因持续强直发作而死亡，死亡率为33．8％。NC组 动物均无行为学改变。 2大鼠海马组织学改变对照组脑组织的形态学结构正 常，细胞完整，神经细胞多呈三角形，核较大，胞浆里可见 有深染的尼氏小体。SE组均可见神经细胞水肿、缺失、变性、 坏死，尼氏小体消失，核浓缩、深染。海马区可见点状软化 中文摘要 灶，以24h最为明显，6h$l：172h脑损伤较轻。 3大鼠海马P75NTRmRNA和蛋白的表达SE后6h， 4 的免疫反应物呈棕褐色，主要位于海马CAl区、CA3区