窒息对新生鼠肺织rbd-2、sp-a和nf-κb表达的影响.pdfVIP

窒息对新生鼠肺组织RBD．2，SP-A和NF-KB表达的影响 窒息对新生鼠肺组织RBD一2、SP．A和NF—KB表达的影响 专 业：儿科新生儿 硕士研究生：杨艳红 导 师：苏浩彬副教授 摘要 随着围生医学的发展和窒息新法复苏技术的普及，窒息新生儿的存活率较前 有了明显提高，对窒息并发症的防治也逐渐成为近年来研究的热点，如缺氧缺血 性脑病、颅内出斑、肾脏损害等。既往的研究结果提示新生儿窒息后机体的免疫 功能明显受抑制，窒息新生儿发生肺炎、败血症的几率也比较高。因而进一步研 究窒息对免疫功能的影响，提高窒息新生儿的免疫力，对提高新生儿的存活率和 改善新生儿的健康状况有着重要意义。目前，窒息所致新生儿免疫功能异常的机 制尚不完全明确，一些研究结果表明，窒息可导致细胞免疫、体液免疫和红细胞 免疫功能下降，窒息后神经内分泌系统的异常也可影响机体的免疫功能。既往的 研究多集中在特异性免疫方面，对于在新生儿期发挥主要作用的非特异性免疫则 研究较少。在呼吸系统的局部免疫防御方面，B一防御素一2(RBD一2)和肺表面活 性物质结合蛋白A(sP_A)具有非常重要的意义，窒息是否对肺脏的局部免疫存 在影响，以及影响的作用机制如何，目前关于此方面的报道还比较少。 本实验采用常压低浓度氧通气建立窒息新生大鼠模型，观察该模型大鼠肺组 mRNA、SP．AmRNA的动态变化，探讨窒息 织的病理改变及肺组织中RBD-2 因表达中的作用，旨在为今后外源性补充RBD．2、SP-A或干预信号转导通路以 调节体内RBD．2、SP．A含量提供理论依据和实践方向。 窒息对新生鼠肺组织RBD-2、SP-A和NF-r,B表达的影响 材料与方法 1．研究对象：健康清洁级1日龄新q：SD大鼠96只，雌雄不限，体重(5．59一-7．og)， 随机分为对照组、窒息组、窒息+PDTC组，每组32只。 2．动物模型：窒息组、窒息+PDTC组新生鼠放入密闭缺氧箱内，通入含7％02、 93％N2的混合气体，钠石灰吸收二氧化碳，温度、湿度恒定。通气2h后，将新 生鼠放出，恢复正常通气于自然空气中。对照组、窒息组窒息前lh腹腔内注 3．标本采集及处理：每组新生鼠分别于复氧后3h、24h、72h，120h处死，取左 肺置于10％福尔马林中固定，制备石蜡切片；右肺置于液氮中，转运至．8012 冰箱保存待测。 4．实验方法及检测指标：石蜡切片HE染色光镜下观察肺组织病理形态学变化： mRNA、SP．AmRNA的表达水平。 结果 I．窒息对新生鼠一般状况的影响 新生鼠置于缺氧箱内后，逐渐出现呼吸加快、皮肤苍白和不同程度的发绀， 窒息早期新生鼠的自主活动增多，随窒息时间延长自主活动逐渐减少，个别出 现四肢抽动，这些改变出现的时间和表现程度存在个体差异，在恢复供氧后， 上述现象基本缓解，但窒息新生鼠仍表现出活动少、反应差、体重增长缓慢等。 而对照组则活动好、反应灵敏，无以上异常表现。 2．肺组织的病理改变 对照组出生后肺泡上皮逐渐发育成熟，肺间质逐渐减少，肺泡逐渐增多， 肺泡体积也逐渐增大，而且肺泡大小均匀一致。窒息组3h可见肺间质稍肿胀， 肺泡内有少量散在的红细胞；24h可见肺间质水肿，肺小血管扩张、充血，有 的区域呈片状出血，肺泡腔内炎性细胞渗出等病理变化；72h，120h上述变化 II 窒息对新生鼠肺组织RBD-2、SP．A和NF-v．B表达的影响 逐渐好转，但肺间质增厚，肺泡体积较小，肺泡大小不均匀。窒息+PDTC处 理组较窒息组各时间点的病理变化稍减轻，但仍可见问质水肿、炎性细胞浸 润等变化。 3．肺组织NF．心p65表达水平的动态变化 免疫组化染色显示NF．xBp65蛋白在对照组新生鼠肺组织呈阴性或弱阳性 反应，偶见胞核着色。窒息组与对照组相比，多个时间点呈阳性反应，阳性反 应产物不仅分布于阳性细胞的胞浆中，细胞核也呈阳性反应，表