肝癌化学免疫治系列研究ⅱ-化疗药物诱导肝癌细胞凋亡促进细胞膜热休克蛋白表达.pdfVIP

肝癌化学免疫治疗系列研究Ⅱ 中文摘要 肝癌化学免疫治疗系列研究Ⅱ 一化疗药物诱导肝癌细胞凋亡促进细胞膜热休克蛋白表达 硕士生：杨梅 导 师：闵军副教授 专 业：外科学 中文摘要 研究目的 研究不同敏感性化疗药物诱导肝癌细胞株HepG2凋亡对热休克蛋白 HSP70、gp96表达的影响。为临床肝癌的化学一免疫治疗方案和肿瘤个体化疗 提供理论和实验依据。 实验方法 MTT比色法、ATP-TCA化学发光法检测不同化疗药物对人源性肝癌细胞株 HepG2生长的抑制作用，筛选出敏感和耐药药物。分别用敏感和耐药药物作用 于HepG2，直接免疫荧光、流式细胞学方法检测细胞胞浆和胞膜热休克蛋白 V法检测凋亡。 (HSP70、gp96)的表达差异和表达趋势，Annexin 实验结果 1． 药物敏感性检测 1．1 MTT法检测化疗药物对肝癌细胞株HepG2的抑制作用 表阿霉素、足叶乙甙、泰素等对HepG2细胞生长抑制率高，卡铂、开普拓、 丝裂霉素等对HepG2的抑制率低，差异有统计学意义(po．05)；随药物浓度降 低各化疗药对HepG2的抑制率降低。 1．2 ATP．TCA法检测肝癌细胞株HepG2对化疗药物的敏感性 肝癌细胞株HepG2敏感的药物为：足叶乙甙、表阿霉素；耐药的药物为：丝 裂霉素、卡铂。药敏检测结果与MTT检测结果相符合。由药敏结果选出足叶乙 甙和卡铂用于后续实验。 2． 热休克蛋白检测 肝癌化学免疫治疗系列研究II 中文摘要 2．1流式细胞学检i见{JHSP70、gp96 呈下调趋势；胞膜MFI较胞内低，随药物作用呈上调趋势。敏感、耐药药物组分 MFI降低较明显，胞膜MFI增 别在药物作用24h、72h后HepG2胞浆HSP70、gp96 加明显。 2．2免疫荧光检测HSP70、gp96 肝癌细胞株HepG2胞浆HSP70、gp96平均荧光强度较高，敏感、耐药药物作 用后逐渐降低，分别在作用24h、72h后下降明显。 Armexin 3． V法凋亡检测结果 V阳性率增加， 敏感、耐药化疗药均可诱导HepG2凋亡，随药物作用Annexin V阳性率最高。 高敏、低敏药物分别在作用24h、72h后Annexin 实验结论 一致性，HepG2敏感的化疗药有表阿霉素、足叶乙甙等；耐药药物有卡铂、 丝裂霉素等。 2．肝癌细胞株HepG2胞浆高表达热休克蛋白HSP70和gp96，胞膜表达弱于胞浆； 敏感、耐药药物作用于HepG2诱导凋亡的同时胞浆HSP70和gp96表达下调， 胞膜表达上调，呈现胞浆向胞膜转移趋势。 药药物大为缩短；耐药药物在体外诱导膜gp96表达的水平远较敏感药物高。 4．化疗药物通过诱导HepG2细胞胞膜HSP70／gp96表达上调而可能增加肿瘤细 胞的免疫原性。体内治疗方面由于有效药物浓度维持的时问短，敏感药物较 之耐药药物可能有更大优势；体PFDCs肿瘤疫苗制备方面由于耐药药物在持 续长时间作用后能更大程度上调膜gp96的表达从而可能更具优势。 【关键词】：热休克蛋白， 人肝癌细胞，化疗，凋亡，树突状细胞 肝癌化学免疫治疗系列研究II 英文摘要 Researchfor ChemoimmunotherapyHepatocarcinoma(Ⅱ) enhance