泛素连接酶SIE3在百脉根结瘤信号转导中功能及其作用机制研究.pdf

Y2394254lUllnlll1111111 泛素连接酶SIE3在百脉根结瘤信号转导中功能及作用机制的研究 目 录 摘要…………………………………………………………………………………………………………………一i ABSTRACT…．．．．………………．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．………………．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．……………．．．…．．iii 缩略语表…………………………………………………………………………………．Vi 1前言………………………………………………………………………………………………………………1 1．1共生固氮的概念和意义……………………………………………………………1 1．1．1共生体根瘤的形成过程………………………………………………………一1 1．1．2结瘤因子的感知与信号转导途径……………………………………………一2 1．1．2．1结瘤因子的感知……………………………………………………………2 1．1．2．2结瘤因子信号转导途径…………………………………………………一4 112豆科植物中的共生受体激酶………………………………………………………7 1．2．1植物中的受体蛋白激酶………………………………………………………一7 1．2．2共生受体激酶SYMRK．………………………………………………………一7 1．2．2．1共生受体激酶SYMRK的结构与功能研究………………………………7 1．2．2．2共生受体激酶SYMRK的互作蛋白………………………………………9 1．3蛋白质的泛素化修饰……………………………………………………………．12 1．3．1蛋白质泛素化的概念与意义…………………………………………………12 1．3．1．1泛素化信号………………………………………………………………12 1．3．1．2参与泛素化过程的酶……………………………………………………。13 1．3．1．3蛋白质泛素化场所………………………………………………………14 l-3．2蛋白质泛素化修饰的功能……………………………………………………15 1．3．2．1蛋白质泛素化降解功能…………………………………………………15 1．3．2．2非蛋白质泛素化降解功能………………………………………………．17 1．4泛素连接酶………………………………………………………………………．19 1．4．1泛素连接酶的分类及特征……………………………………………………19 1．4．1．1 HECT家族的泛素连接酶………………………………………………一19 1．4．1．2 RING．FINGER家族的泛素连接酶………………………………………20 1．4．2泛素连接酶的作用机制………………………………………………………22 1．4．3泛素连接酶参与豆科植物根瘤菌侵染及根瘤形成…………………………23 1．5研究的目的与意义………………………………………………………………一24 2材料与方法……………………………………………………………………………25 2．1载体和菌株………………………………………………………………………．．25 华中农业大学2013届博士研究生学位论文 2．2植物材料…………………………………………………………………………一27 2．3蛋白质酵母体内相互作用的验证．酵母双杂交系统……………………………．27 2．3．1酵母培养基……………………………………………………………………27 2．3．2酵母双杂交相关试剂…………………………………………………………28 2．3．3酵母转化………………………………………………………………………29 2．3．3．2 LABOF LIAC法高效转化酵母方法二(THE 2．3．4酵母小范围MATING…………………………………………………………30 2．3．5 B．半乳糖苷酶活性检测………………………………………………………31 2．4体外蛋白PULL．DOWN分析蛋白