信号分子与叶锈菌诱导下小麦病程相关br蛋白1基因的表达分析.pdfVIP

— ２８— 江苏农业科学　２０１５年第４３卷第９期 栗小英，刘景坤，张艳俊，等．信号分子与叶锈菌诱导下小麦病程相关蛋白１基因的表达分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１５，４３（９）：２８－３１． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１５．０９．００７ 信号分子与叶锈菌诱导下小麦病程相关 蛋白１基因的表达分析 栗小英，刘景坤，张艳俊，王海燕，刘大群 （河北农业大学植物保护学院／河北省农作物病虫害生物防治工程技术研究中心，河北保定０７１０００） 　　摘要：病程相关蛋白１（ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ１，ＰＲ１）是一类以基因家族形式存在的重要病程相关蛋白，在 前期研究中，在小麦抗叶锈病近等基因系材料ＴａＬｒ３５中成功获得了１个小麦病程相关蛋白１基因ＴａＬｒ３５ＰＲ１，具有植 物防御体系中的ＳＣＰ保守结构域。利用生物信息学方法进一步明确，该基因含有信号肽，定位于细胞间隙，可能含有 跨膜结构域，相对分子量为１７．３ｋｕ，与多个植物病程相关蛋白１序列具有较高同源性；利用半定量ＲＴ－ＰＣＲ方法结 合ｇｅｎｅｔｏｏｌｓ、ＳＰＳＳ软件分析ＴａＬｒ３５ＰＲ１基因表达模式，结果表明，信号分子水杨酸（ｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄ，ＳＡ）、脱落酸（ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ，ＡＢＡ）明显诱导该基因表达，且用信号分子预处理后接种叶锈菌，基因表达量明显增加；构建了ＴａＬｒ３５ＰＲ１基因 的原核表达载体ｐＥＡＳＹ－ＰＲ１，在大肠杆菌中高效表达分子量约为 １７ｋｕ的融合蛋白，明确其最佳诱导条件为在 ０．８ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ下于２５℃诱导８ｈ。 　　关键词：叶锈菌；信号分子；病程相关蛋白１；表达分析；原核表达 　　中图分类号：Ｑ７５６　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１５）０９－００２８－０４ 　　植物在长期的进化过程中，为了抵抗病害对自身生长的 灭（ｅｎｄｏｔｈａｌｌ，ＥＮ）和稻瘟病菌（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅｇｒｉｓｅａ）的诱导，对 不良影响，在一定程度上发展了感受生物胁迫信号的机制，通 光伤害及磷酸酶抑制剂等环境胁迫和化学处理作出反 ［６－８］ 过体内的信号传导途径，激发转录因子与相应的顺式作用元 应 。杨德翠等研究发现，ＰＲ１基因表达量与水杨酸的积 件的结合，进而启动特定基因的转录和表达，最后导致植物对 累密切相关，表达量的升高增强了牡丹对柱枝孢叶斑病 ［１］ 胁迫作出反应 。病程相关（ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄ，ＰＲ）蛋白 （Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃｌａｄｉｕｍｃａｎａｄｅｎｓｅ）的抗性，并且发现该病侵染牡丹 ［９］ 质在信号传递与胁迫应答中起调节作用。ＰＲ基因的最初发 ２４ｈ后，ＰＲ１基因的表达显著提高 。 现主要是由于它们在植物受到病原物侵染时会大量表达。 小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ）是重要的粮食作物，是全世界一 ＰＲ蛋白质除了在抗病反应中发挥重要作用外，在植物抗衰老、 半以上人口的主粮。小麦生产经常受到病虫害的威胁，尤其 伤害、非生物逆境胁迫和激素处理，以及正常生长中也发挥重 由小麦叶锈菌（Ｐｕｃｃｉｎｉａｔｒｉｔｉｃｉｎａ）引起的小麦叶锈病是威胁全 要作用。在ＰＲ蛋白家族中，ＰＲ１是一类重要的蛋白，但对其 球小麦稳产高产的主要病害之一。小麦抗叶锈病基因Ｌｒ３５， ［２］ 作用机制以及靶物质还尚不了解 。水杨酸（ｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄ， 其抗性从２叶期开始表达，６叶期完全表达，是 １个十分有效 ＳＡ）或乙烯（ｅｔｈｙｌｅｎｅ）可诱导ＰＲ１基因的表达，常被作为系统 的成株抗叶锈病基因。笔者前期利用 ＲＴ－ＰＣＲ和