姚江水系中华鳖不同组织3种同工酶的表达差异.pdfVIP

— ２４４— 江苏农业科学　２０１５年第４３卷第７期 郑小青，梅依霞，洪?飞，等．姚江水系中华鳖不同组织３种同工酶的表达差异［Ｊ］．江苏农业科学，２０１５，４３（７）：２４４－２４７． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１５．０７．０８４ 姚江水系中华鳖不同组织３种同工酶的表达差异 郑小青，梅依霞，洪?飞，汪财生，唐　伟，钱国英，李彩燕 （浙江万里学院生物与环境学院，浙江宁波３１５１００） 　　摘要：采用聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳法，对姚江水系中华鳖（Ｐｅｌｏｄｉｓｃｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）的６种组织（心脏、肝脏、脾 脏、肾脏、肌肉、肺）中的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、酯酶（ＥＳＴ）、谷氨酸脱氢酶（ＧＤＨ）３种同工酶进行了初步研究，并与日本 品系中华鳖的同工酶谱图进行了对比。结果表明：２个品系中华鳖的同工酶具有不同程度的组织特异性，ＬＤＨ组织差 异极为明显；姚江水系中华鳖相同组织ＬＤＨ整体表达量与日本中华鳖类似，ＥＳＴ－１表达量高于日本中华鳖，ＧＤＨ整 体表达量低于日本中华鳖，肌肉中ＧＤＨ－３表达量高于日本中华鳖。本研究得到了姚江群体中华鳖的标志性酶谱，并 明确了其与日本品系中华鳖酶谱的差异和特殊性。 　　关键词：中华鳖；同工酶；表达；组织特异性；乳酸脱氢酶；酯酶；谷氨酸脱氢酶 　　中图分类号：Ｓ９１７．４　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１５）０７－０２４４－０３ 　　中华鳖（Ｐｅｌｏｄｉｓｃｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）又称水鱼、团鱼、元鱼、甲鱼 浙江省余姚市明凤淡水养殖场，日本品系中华鳖取自绍兴中 等，是我国重要的特种经济动物和名特优水产养殖品种之一。 亚工贸园有限公司。 近１０余年来，在养鳖业蓬勃发展的同时，人们对野生资源的 １．２　样品制备 不合理开发加剧，中华鳖的生存形势持续恶化，原种资源不断 活鳖运回实验室后，迅速杀死取其心脏、肝脏、肾脏、脾 减少。过度的食用消费、栖息地的破坏、化学污染等因素导致 脏、肺和腿部肌肉，称质量后加入 Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液（ｐＨ值 我国中华鳖种质资源遭受严重破坏，种群面临大规模锐减、濒 ７５）进行匀浆，再离心２０ｍｉｎ，取其上清液与甘油按 １∶２混 临灭绝的境地，尤其是一些特殊地域种群的原种地没有引起 合后，直接电泳或于－８０℃保存备用。 足够的重视。如主要分布在宁波姚江流域的姚江水系中华鳖 １．３　电泳 原种已处于濒危状态，野生种质资源稀缺。该群体中华鳖抗 采用聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳法［４－７］，操作步骤参 病力强、适应性好、肉质鲜美、胶质浓郁，深受消费者喜爱。姚 ［５］ 考区又君等报道的方法 进行，电泳过程使用夹心式垂直板 江水系中华鳖除了具有中华鳖的基本固有特征外，主要特征 电泳槽（Ｍｉｎｉ－ＰＲＯＴＥＡＮＴｅｔｒａ），取１０ Ｌ样品加样。分离胶 μ 为腹部有４处明显花斑，与其他品系中华鳖差异非常明显。 浓度为７．５％（ｐＨ值８．８），浓缩胶浓度为４．５％（ｐＨ值６．８）， 目前，关于中华鳖同工酶的研究大多集中于黄河群体、太湖群 电极缓冲系统为Ｔｒｉｓ－Ｇｌｙ（ｐＨ值８．３），在 １６０Ｖ恒压、冰浴 体和台湾群体［１－３］，而姚江水系中华鳖同工酶表达差异的研 中电泳２ｈ（除ＥＳＴ研究的电泳时间为１．５ｈ外）。 究尚未见报道。为了有效保护中华鳖的种质资源，保持地方 ［６］ ［７］ 电泳后的凝胶染色参照何忠效等 和郭尧军 的操作 种群优良的种质性状，应用聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳法 方法，并加以修改（表 １）。在电泳结束前，提前配制好染色 对姚江水系中华鳖６种不同组织中的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、酯