小桐子高分辨率细胞学图的建立.pdfVIP

江苏农业科学　２０１３年第４１卷第１１期 — ３７７— 龚志云，张明亮，薛　超，等．小桐子高分辨率细胞学图的建立［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（１１）：３７７－３８１． 小桐子高分辨率细胞学图的建立 龚志云，张明亮，薛　超，石国新，刘秀秀 （扬州大学江苏省作物遗传生理重点实验室／教育部植物功能基因组学重点实验室，江苏扬州２２５００９） 　　摘要：摸索出小桐子高分辨率细胞学图的建立方法，在小桐子的染色体制片过程中，根尖的长短、预处理的时间、 酶解相关因素对试验影响较大。小桐子根尖长度为１．５～２．０ｃｍ，０．００２ｍｏｌ／Ｌ８－羟基喹啉预处理２ｈ时，３７℃酶解 １．５ｈ后得的染色体浓缩程度适宜，分散均匀、形态清晰、细胞分裂相较多，没有细胞质覆盖。小桐子花粉母细胞直径 在２ｍｍ左右能获得较多粗线期染色体浓缩的分裂相。 　　关键词：小桐子；高分辨率；染色体 　　中图分类号：Ｑ９４３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）１１－０３７７－０４ 　　荧光原位杂交技术作为一项分子细胞遗传学工具，具有 在小桐子根尖生长适宜时期，收取大量根尖，置于 灵敏、特异、准确、安全、快速、高效等特点，在人类、动植物、微 ０．００２ｍｏｌ／Ｌ８－羟基喹啉２０℃恒温处理，预处理后的根尖 生物诸多领域获得了广泛应用。近年来，利用 ＦＩＳＨ技术对 经卡诺氏固定液固定，固定后的材料置于 －２０℃冰箱中 植物进行有关基因组物理图谱构建、染色体核型分析、物种亲 备用。 缘进化、功能基因定位、转基因位点检测等方面的研究日渐增 １．２．１　根尖染色体的制备　将经预处理并固定后的根尖用 ［１－５］ ［６－９］ 多 。小桐子作为能源植物 运用 ＦＩＳＨ技术进行细胞 蒸馏水冲洗２次，然后切取０．１～０．２ｍｍ的根尖生长点区置 学研究意义深远，而 ＦＩＳＨ技术成功应用的前提是要求制片 于２０ｇ／Ｌ纤维素酶和１０ｇ／Ｌ果胶酶的混合液中进行酶解去 过程中，制作出染色体标本分裂相多、杂质少、染色体分散且 壁处理。吸去酶混合液将酶解好的根尖用新配的卡诺氏固定 形态好的标本。对于小桐子来说，染色体制片方面研究少有 液清洗３次，然后再加入适量固定液固定５ｍｉｎ以上，并置于 ［１０］ 报道 ，小桐子细胞质浓厚、染色体体形相对较小、中期分裂 －２０℃冰箱中备用。 ［１８］ 指数低、相邻染色体形态相似等。采用常规压片方法，染色体 制片按Ｋｕｒａｔａ的方法 稍加修改进行，取清洗干净的载 很难分散，细胞质残留多、背景深，且原位杂交前冷冻揭片步 玻片，从冰箱中取出备用的根尖，置于载玻片上，滴加适量固 ［１１］ 骤不好掌握 。而酶解去壁低渗火焰干燥可以解决上述问 定液，用镊子迅速敲碎根尖，于载玻片上滴加适量固定液，置 题，近年来，众学者在水稻、甘蓝、芦笋、黄瓜、柑橘等［１２－１５］作物 于酒精灯上点燃，使其充分燃烧，将玻片置于玻片框中，晾干 探索过酶解去壁低渗法制备中期染色体技术，并取得了良好效 待用。取晾干的玻片，加入２０ Ｌ含有２ Ｌ／ｍＬＤＡＰＩ的抗 μ μ 果，特别是花粉母细胞染色体的制片，但在小桐子上还未见报 褪色剂，缓缓盖上盖玻片，压片，观察，拍照。 ［１９］ 道，建立一套小桐子高分辨率细胞学图十分必要。本试验借鉴 １．２．２　花粉母细胞染色体的制备　制片按Ｗｕ的方法 稍