3-氨基苯甲酰（3-ab）对实验性大鼠脊髓打击伤的神经保护的研究.pdf

中文摘要 3～氨基苯甲酰胺(3-AB)对 实验性大鼠脊髓打击伤的神经保护的研究 摘 要 脊髓损伤(SCI)是一种在jV-时或战时都很常见的严重 的损伤，可引起患者的肢体运动、感觉及括约肌功能障碍， 甚至死亡。随着：[业化及交通事业的发展，脊髓损伤在近年 有增多的趋势。因此，加强对脊髓损伤的及时治疗，特别是 防止脊髓继发性损伤，以减少严重神经功能障碍的发生是目 前研究的一个热点。原发性脊髓损伤激发的一系列病理因素 与组织进行性破坏过程称脊髓继发性损伤。大多发生在损伤 后4--6小时之内，多有脊髓中心性缺』缸、出血和坏死。20年 来，随着对SC!病理基础及其分子机制研究的深入，药物治 疗SC!在预防脊髓继发性损伤过程中显示积极有效的作用。 近几年，有关聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)在神经损伤 中的作用的实验性报道不断增多。PARP是广泛存在于有核 细胞中的多功能酶，是一种丰富的核蛋白。pbJ2d：1对维持细 胞的正常功能具有极为重要的怍用，其异常可能其导致细胞 死亡的因素之一。因此，如何使PARF在神经损伤中发挥正 常保护作用并减少损伤作用，目前已成为热门科研题目之 一。3一氨基苯甲酰胺(3-AB)是一种选择性的PARP抑制剂， 其可以减少脊髓损伤后的兴奋性氨基酸及一氧化氮的释放， 抑制PARP的耗氧及耗能，降低神经细胞死亡。实验证明， 低剂量3-AB可暂时非完全性抑制PARP对神经细胞的损伤 而起到神经保护作用，但多为3一AB在脑缺血性损伤中的实 中文～摘要 验研究报道，有关在脊髓神经保护方面未见报道。 目的：通过对实验性大鼠脊髓损伤后的后肢运动功能评 以及应用抑制剂前后的对比，检测PARP在脊髓损伤中的表 达规律，评估3-AB在脊髓损伤中的神经保护作用，为脊髓 损伤的临床药物治疗提供新的理论依据。 方法：1、实验动物和分组：健康SD大鼠90只，体重 后正常饲养。B：损伤对照组：B1：损伤后即经尾静脉注射生 理盐水(6只)：B2：损伤后6小时注射生理盐水(6只)：B3： 疗组：C1：损伤后给药(6只)；C2：损伤后6小时给药(6只)： 给药方式同C。E：3-AB30mg／kg治疗组：给药方式同C。 3-AB经尾静脉注射。B、C、D、E各组动物分别于经尾静脉 给药或生理盐水后观察24小时后处死；A组动物分3组(n =6)，分别于相对应的时间处死以作对照。2．改良ALLEN 脊髓损伤模型的建立：大鼠行0．3％戊巴比妥钠(30mg／kg) 腹腔麻醉后固定于立体定向仪上，手术暴露T11、T12、L1 椎板，咬除椎板，尽量不损伤脊髓，然后缝合伤口，正常饲 养2天。有后肢神经功能障碍者被剔除。2天后，再次麻醉 后固定，打开原手术切口，暴露T12脊髓，用改良的Allen 装置造成T12脊髓打击伤，致伤力为7．59×10cm，造成大鼠 脊髓中度损伤。缝合伤口。动物温室隔离喂养。3、动物处 死方法和标本制作：按需要在不同时期，用1％苯巴比妥 50mg／kg快速推注处死动物，小心取出损伤节段脊髓，取一 中文摘要 半快速放入4％多聚甲醛(4℃)液中固定12小时，以备石 蜡切片后行病理检查。另--7快速放入液氮中2分钟后．80 。C冰箱冻存。3、神经功能评定：于处死前测定每组大鼠后 肢运动功能。神经功能评定采用TARLOV(0—5)评分标准。 (0：双后肢瘫痪1：后肢对刺激有反应，但无自主运动2： 有自主运动，不能站立3：能站立，但不能行走4：能行 走，可有痉挛5：能行走，且能平衡。)评定前排空膀胱。4、 病理学评定：将固定后的标本连续切片(厚10“m)，行Nissl 氏染色，经华东理工大学自动化所细胞图象分析系统Version 2．0处理，计算脊髓断面的总面积和损伤面积。5：PARP活 性检测：将冰存的脊髓组织标本在冰浴PBS液中粉碎匀浆， Nacl10mmol 沉淀加入A液(100mmol Tris—Hcl pH7．6 lmmolEDTApH8．0lug／mlaprotinin100ug／ml苯甲磺胺氯化 小时，然后用T-T