与凋亡相关的斑样蛋白（asc）在大鼠急性胰腺炎中的作用机制.pdfVIP

中文摘要 与凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)在大鼠急性胰腺炎中 的作用机制 摘要 目的： 研究大鼠发生急性胰腺炎时，与凋亡相关的斑 况，为评价ASC在大鼠急性胰腺炎时的作用机制提供实验依 据。 方法：(1)将20只健康、成年的SD大鼠随机分成两组， 一组用5％去氧胆酸钠逆行注入大鼠胰胆管进行急性胰腺炎 造模，另一组作为正常对照组。造模24小时后处死大鼠， 取大鼠新鲜血清，通过全自动生化分析仪检测大鼠血清淀粉 酶活性；用ELISA法测定血清IL一1B含量。取大鼠胰腺组织 经脱水、透明、浸蜡、包埋，做成蜡块后连续切片，用免疫 染色的切片置于Olympus多功能显微镜观察并摄像，应用 CA6300彩色图像分析系统进行定量灰度扫描，求出给定面积 内的灰度值，比较急性胰腺炎组和正常对照组问ASC和 Q大 caspase-1两项指标表达的差异。(2)制备感受态的DH5 粒的扩增，应用大连宝生物公司生产的试剂盒、采用SDS碱 裂解法提取和纯化质粒。(3)复苏巨噬细胞系P388D1细胞， 加入1640培养液约10ml混匀，分装至两个无菌培养瓶中， 中文摘要 37℃，5％C0：培养箱中培养48小时。从培养瓶中取出3001．t 1细胞液加到24孔培养板中汇片，置37。C，5％C0。培养箱中 培养24小时。在倒置显微镜下观察，当细胞覆盖至小孔底 部一半时使用大连宝生物公司生产的转染试剂盒将纯化的 胞中继续培养24小时，最后涂片后进行荧光拍照，观察质 粒在P388D1细胞中的表达情况。 结果： (1)急性胰腺炎组血清淀粉酶水平(77632± 升高，两者间的差异在统计学上有意义白0．01)；急性胰腺 炎组IL一1 caspase一1在正常对照组大鼠胰腺组织中少量表达，在急性 胰腺炎组表达显著增加，两组问灰度值(24．86± 胞中ASC寡聚成斑点样。 结论： 本实验证明了当发生胰腺炎时，单核一巨噬细胞 系统激活，在胰腺组织的巨噬细胞中ASC的表达上调，发生 13的分泌增加，引 寡聚并调节caspase一1的活化，导致IL-1 起炎症反应，从而证明ASC在胰腺炎的发病中起重要作用。 关键词：与凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)：急性胰腺炎； IL一1 caspase一1； B；P388D1细胞 英文摘要 mechanismof The apoptosis-associatedspeck—like in a recruitmentdomain proteincontainingcaspase acute inrats pancreatitis ABSTRACT theeffectsof Objective：To study ciated a recruitment speck—likeproteincontainingcaspase andIL-1Binacute domain)oncaspase一1 ratsandhowitis in P388D1