人体血管平滑肌电导钙激活钾通道基因表达的老年性变化.pdfVIP

人体血管平滑肌大电导钙激活钾通道基因 表达的老年性变化 摘 要 目的：对老年组和青年组人体肠系膜动脉平滑肌细胞上编码大电 导钙激活钾通道BKca的基因KCNMBl表达水平进行相对定量分析， 探讨血管老化过程中大电导钙激活钾通道基因表达变化及其意义。方 法：(1)研究对象：选取因消化道疾病需行腹部手术的住院患者33 例。老年组17例，年龄60～81岁，男9例，女8例，其中胆石症10 例，消化性溃疡7例。青年组16例，年龄3040岁，男8例，女8 例，其中胆石症7例，消化性溃疡9例。所有研究对象均无高血压病、 冠心病、糖尿病及外周血管硬化性疾病等，术前未使用对血管舒缩功 能有影响的药物，术中经探查无肠道血管病变。(2)提取2组人体 肠系膜动脉平滑肌细胞的总RNA，经琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光 FristStrandcDNA Kit 度。(3)采用MBI公司的RevertAidTM Synthesis 并严格按说明反转录合成第一链cDNA。(4)对反转录产物进行常 规PCR，检测目的基因的cDNA片断的质量。(5)荧光定量聚合酶 中的表达。用看家基因甘油醛．3．磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参照 对KCNMBl的cDNA起始浓度进行标化，对标化结果进行分析。每 个样品的GAPDH和KCNMBl分管l司板相同条件下进行扩增反应， 每次反应均作空白对照(不加模板)排除污染可能。每个样品重复三 次，获得的cDNA相对起始浓度结果取均值。结果：(1)老年组平均 RNA经琼脂糖凝胶电泳后可见28S、18S、5S3条带，无DNA污染 纯度较高。(3)常规PCR结果：经1．5％琼脂糖凝胶电泳后可见129bp 清晰亮度不同的条带，说明引物设计合成无误，KCNMBl的cDNA 模板可用于荧光定量PCR。(4)荧光定量PCR结果：老年组与青年 ±0．424)％，老年组较青年组降低，两组差异有显著性意义(f--3．133， P=0．004，P0．01)。结论：血管平滑肌上编码钙激活钾通道的基因 KCNMBl表达减弱可能是血管老化过程中其舒缩能力下降的重要分 子生物学机制。 关键词：血管老化； 钙激活钾通道；KCNMBl基因；荧光定 量PCR onthedifferent levelsof conductance expression Study large calcium-activatedchannelsinhumanvascularsmooth potassium ／ 、 muscle duringaging the of Abstract：objective：Toinvestigatetranscriptionalregulation KCNMBl encodesthe131subunitof conductance gene，which Large calcium—activated mesentericsmooth potassiumchannels(BKca)ofartery musclecells during patients aging．Methods：1．Resear