人热休克蛋白7基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化.pdfVIP

中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对拳研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名：照日期：2蔓!!：兰{。 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印，缩 印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 指导教蛹签名： 中文结构式摘要 人热休克蛋白70基因在大肠杆菌 中的融合表达及纯化 目 的 shock 热休克蛋白70(heat 70，HSPT0)做为肽的运载工具，参与 protein 人体内诸多重要的生理功能。近年来，关于HSPT0与肿瘤免疫的研究成为 热点。目前，已有国外研究机构，应用HSPT0一肽复合物进行某些肿瘤的临 床治疗。但由于对HSPT0参与肿瘤免疫的机制了解有限，这种治疗方法只 限于个体化的肿瘤治疗，不便临床广泛应用。因此，进一步阐明HSP70在 机体肿瘤免疫过程中的作用及方式是突破这一“瓶颈”的关键，而获得纯化 载体，试图体外获得纯化的HSP70蛋白。 方 法 1扩增目的基因：用SDS裂解的方法从胆管癌组织中提取基因组DNA 一3’(划线处为EcoR 7rACCTCCTCAATGGTG一3’(划线处为XhoI酶切位点)，由宝生物工程(大 DNA PCR扩增目的 PlrrobestTMPolymerase 连)有限公司合成。使用TaK冰a Mixture Buffer dNTP 基因(10×Pyrobest 4止、模板1一、5U／止 5出、25mmol／L PyrobestDNA PCR Kit切胶回收目的 Recovery 基因分离情况，然后使用TaK龌a Fragment 基因片段。 2目的基因的克隆及序列测定：将目的基因与末端平滑处理后的 pMDl8一T Simple质粒进行16℃连接反应。连接液全部热转化至大肠肝菌 JMl09中，涂布平板过夜培养菌体。挑选白色菌落，提取质粒后，取1¨l_进 行琼脂糖凝胶电泳，然后选取阳性质粒进行DNA测序。 DNA 3构建重组表达载体：使用TaKaRa Ligation I