第九章转基因动物与生物反应器资料.ppt

第九章 随着DNA内部结构和遗传机制的揭示，生物学家不再仅仅满足于探索、揭示生物遗传的秘密，而是设想在分子水平上去改造生物的遗传特性。 如果将一种生物DNA中的某个遗传密码片段连接到另外一种生物的DNA链上去，将DNA重新组织一下，就可以按照人类的愿望设计出新的遗传物质，从而创造出新的生物。 这种按照人的意愿，由重新组装基因到新生物产生的生物技术，就称为基因工程技术。 基因工程技术的特点： 基因体外重组、即在离体条件下对DNA分子切割并将其与载体DNA分子连接，得到重组DNA。 世界上第一批重组DNA分子诞生于1972年，次年几种不同来源的DNA分子装入载体后被转入到大肠杆菌中表达，标志着基因工程正式登上历史舞台。 发展：1、外来基因能在生物体内表达 1974年，美国斯坦福大学教授科恩把金黄色葡萄球菌的抗药性基因片段和大肠杆菌的质粒“组装”成杂合质粒，送入大肠杆菌体内，使这种大肠杆菌获得了对青霉素的抗药性。 这说明金黄色菌萄球菌质粒上的抗青霉素基因由杂合质粒带到大肠杆菌体内，更重要的是表明外来基因在大肠杆菌体内同样也发生作用。 2、 基因工程完全可以不受生物种类的限制，而按照人类的意愿去拼接基因，创造新的生物。 1974年，科恩又将非洲爪蟾的DNA与大肠杆菌的质粒“拼接”，获得成功，拼接后的杂合质粒进入大肠杆菌，产生了非洲爪蟾的核糖体核糠核酸(rRNA)；两栖动物的基因能在细菌里发挥作用． 科恩随后以DNA重组技术发明人的身份向英国专利局申报专利、因此成为世界上第一个基因工程的技术专利拥有人。 科恩的实验首次打破了不同物种在亿万年中形成的天然屏障，他的成功标志着任何不同种类生物学基因都能通过基因工程技术重组到一起，人类可以根据自己的意愿定向地改造生物的遗传特性，甚至创造新的生命类型。 人类历史上第一次具备了精确、细致地控制生物生长过程的能力。比如：我们可以从在极地生活的鱼类中提取抵御严寒的基因，再把它们插入到草莓中去，让草莓也能在极寒的地区生存。如今，基因重组技术在生产医药上重要的药物以及在农牧业育种等领域中取得了很多成果。 对于基因工程，范围是相当广泛的。如对于基因工程动物而言，就有转基因、基因替换、内源基因敲除等类型的基因工程动物。 本章仅重点介绍基因工程中的转基因技术，即： 将通过人工操作的方式将外源基因整合到生物体基因组内，使该转基因生物能稳定地将此基因遗传给后代的实验技术。 基因转移的方法 物理方法 化学方法 生物学方法 向细胞中导入外源基因是定向改变细胞遗传性状的常用手段。 要使外源基因有效地转入受体细胞 首先 要选择合适的受体细胞 其次 要有可靠的转化后筛选方法 常用的哺乳动物细胞转染(接受外源基因)的方法有两种： (1)暂时转染：质粒在宿主细胞中不必停留很长时间，DNA被转录成mRNA，随后翻译成蛋白，并不进入细胞基因组。磷酸钙沉淀法、DEAE—葡聚糖法均为暂时转染。 (2)永久性转染：反转录病毒载体法可以产生永久有效的转染。 (一)电穿孔法 这种方法利用脉冲电场提高细胞膜的通透性，在细胞膜上形成纳米级的微孔，从而使外源DNA转移至细胞中。 这种方法简单、效率较高，因而广泛应用于培养细胞的基因转移。 将受体细胞悬浮于含有待转化DNA的溶液中，在盛有上述悬浮液的电击池两端施加短暂的脉冲电场，使细胞膜产生细小的空洞达到增加通透性的效果；此时，外源DNA片段能不经过胞饮作用就能直接进入细胞质。 （二)微注射法 显微注射法主要用于制备转基因动物。基本操作方法如下9-2。 通过激素疗法使雌鼠超数排卵，并与雄鼠交配，然后处死雌鼠，取出受精卵。然后借助于显微镜将纯化的DNA溶液迅速注入受精卵中变大的雄核内。将该受精卵移植到另外一只假受孕母鼠的输卵管内，正常发育、繁殖出转基因鼠。 优点：这种方法转入的基因长度可达数百kb，并能随机地整合在受体细胞染色体DNA上，因此应用范围广。 缺点：但是这种整合有时会导致转基因动物基因组的重排、易位、缺失或定点突变。 (三)裸露DNA直接注射法 将裸露DNA直接注射到组织中，DNA有可能直接被细胞所摄入。 这是最简单的基因转移方法。但是转移效率较低 基因转移的化学方法主要包括：DEAE－葡聚糖法、磷酸钙－DNA共沉淀法、脂质体载体包埋法等。 主要原理：通过改变细胞膜的通透性或者增加DNA与细胞的吸附而实现基因的转移。 (一)DEAE－葡聚糖法 最早的动物细胞转染方法； 　　主要是将外源DNA片段与DEAE－葡聚糖等高分子碳水化合物混合，这样DNA链上带