小檗碱对血管平肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响.pdfVIP

中文摘要 小檗碱对体外血管平滑肌细胞增殖、迁移 和凋亡的影响 摘 要 目的：经皮穿刺腔内冠状动脉成形术以及支架术是治 疗冠心病的重要而有效的方法，已经成功应用多年，但支架 smoothmuscle 滑肌细胞(vascular cell，vsMC)增殖和迁移是 动脉粥样硬化和经皮腔内冠状动脉成形术及支架术术后再 狭窄的发生发展的重要病理基础。药物洗脱支架(drug eluting stent，DES)的应用已使血管损伤后再狭窄率显著降低，随着 治疗药物缓慢释放入血管壁，血管损伤后血管平滑肌细胞的 增殖和迁移受到抑制，从而减少了血管重塑和支架植入后再 狭窄。近年临床试验已经证实药物洗脱支架植入后再狭窄率 为5—10％，而传统裸支架植入后再狭窄率为20-25％u’“。本 研究观察小檗碱对体外血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的 影响。 方法：用含10％胎牛血清的DMEM培养基培养兔主动 脉平滑肌细胞，传到8～10代，根据小檗碱作用时间不同分 成24小时组和72小时组，每一时间组根据加入小檗碱的浓 blue)溶液染色进行活细胞计数，并 分别用台盼蓝(trypan 仪检测吸光度值，计算细胞生长抑制率，以观察药物对血管 中文摘要 平滑肌细胞增殖的影响。不同浓度小檗碱作用后，用Boyden nitrate 小室法检测穿过硝酸纤维素滤膜(cellulosemembranes， CN)的细胞数，以观察小檗碱对血管平滑肌细胞迁移的影响。 用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端 标记方法(TUNEL)计算各浓度小檗碱作用后细胞凋亡阳性 率，并用流式细胞仪检测细胞凋亡率，以观测小檗碱对血管 平滑肌细胞凋亡的影响。 结果：台盼蓝活细胞计数显示小檗碱作用24小时后， X 10S／L、 度小檗碱干预组活细胞数分别为3．51±0．54 X 1．68±0．05 10札，各实验组与对照组相比有统计学意义 (P0．05)。随小檗碱浓度增加，活细胞数减少。小檗碱作用 X 108／L、 浓度小檗碱干预组活细胞数分别为5．39±0．94 2．01±0．07X10札，各实验组与对照组相比有统计学意义 统计学意义(P0．01)，随小檗碱浓度增加，MTrA值增加。 中文摘要 Boyden小室法检测显示小檗碱作用48小时后，对照组、 干预组的穿膜细胞数分别为50．61±12．11个／高倍视野、 个／高倍视野和19．52±1．64个／高倍视野。各浓度小檗碱组对 兔主动脉平滑肌细胞的迁移均有抑制作用(PO．05)，随小檗 碱浓度增加，穿膜细胞数减少。TUNEL检测显示各组施加 200pmol／L浓度小檗碱干预组的凋亡阳性率分别为 9．72±1．16％，各浓度小檗碱组与对照组相比无显著差异性 (P0．05)。流式细胞仪检测小檗碱作用血管平滑肌细胞48小 胞凋亡率分别为20．4％、18．7％和17．2％。 结论：与对照组相比，各浓度小檗碱组均使血管平滑肌 细胞活细胞数减少，MTrA值增加，生长抑制率增高，随着 小檗碱干预时间的延长，活细胞数减少，MTrA值增加，细 胞生长抑制率增加。与对照组相比，各浓度小檗碱组均使血 管平滑肌细胞穿膜细胞数减少，随小檗