结核分支杆菌耐烟肼分子机理及其耐药基因检测方法的研究.pdfVIP

中文摘要 结核分支杆菌耐异烟肼分子机理及其耐药 基因检测方法的研究 摘 要 异烟肼(INH)是主要的一线抗结核药物之一，结核分 一 支杆菌耐异烟肼直接影响化疗的成功率。大量研究认为，INH 实际上是一种药物前体，需经结核分支杆菌过氧化氢酶一过 氧化物酶氧化为尼克酸的类似物一异烟酸，参与辅酶I的合 成而发挥抗菌作用。结核分支杆菌katG基因含4795个核苷 酸，编码过氧化氢酶一过氧化物酶。若katG基因缺失或突 变，使过氧化氢酶一过氧化物酶活性丧失或降低，阻止INH 转化成活性形式，就会导致结核分支杆菌耐INH。 目的：阐明结核分支杆菌耐INH的分子机制及建立其耐 药基因的检测方法。 方法；通过聚合酶链反应．单链构象多态性(PCR．SSCP) 分析方法对60株临床分离株经16SrRNA基因进行初步的分 子菌种鉴定，对58株结核分支杆菌进行了传统药物敏感性 试验；以结核分支杆菌标准菌株H37Rv做对照，通过PCR- 单链构象多态性(SSCP)方法分析58株结核分支杆菌分离 株katG 273bp片段和inhA255bp片段；PCR直接测序法 (PCR．DS)分析。 结果：160株临床分离株中2株为非结核分支杆菌，余 58株为结核分枝杆菌，其图谱均与结核分支杆菌标准菌株 SSCP图谱相同。对58株结核分支杆菌进行了传统药物敏感 中文摘要 40株结核分支杆菌耐INH分离株和18株INH敏感株分别进 和inhA扩增引物的敏感性均为100pg，特异性标准为结核分 支杆菌复合群。 2以结核分支杆菌标准菌株H37Rv做对照，通过PCR- 单链构象多态性(SSCP)方法分析58株结核分支杆菌分离 株katG (72．5％)katG基因SSCP图谱与结核分支杆菌标准株不同， PCR-DS分析为katG 敏感株和4株泳动异常的耐INH结核分枝杆菌临床分离株进 突变。 的实验条件进行了系统的研究，结果显示采用8％(29：1)非 变性聚丙烯酰胺凝胶在120V稳压下电泳6～8小时效果较理 想。 结论；1结核分支杆菌katG基因和inhA基因突变是耐 INH产生的主要原因。 2通过PCR-SSCP方法检测结核分支杆菌临床分离株， 变检出率为25％。 中文摘要 rRNA 316S PCR-SSCP方法能够简便、快速地将临床分 离株鉴定为结核分支杆菌复合群或非结核分支杆菌。 4 为100pg。 5 菌复合群特异的。 6 床分离株，比DNA测序简便、快速，便于临床推广应用， 可能成为测定结核分支杆菌INH耐药基因型的简便、快速的 方法，可作为常规药敏试验的补充，并有望直接用于临床标 本敏感性试验，指导临床治疗。 关键词：结核分枝杆菌；异烟肼；katG；inhA；药物耐 受性；聚合酶链反应；单链构象多态性 英文摘要 Studiesof The MolecularMechanismof andDetection IsoniazidResistance MethodsofGene Mutationin Tuberculosis Mycobacterium ABSTRACT afirst—lineantituberculous Isoniazid(INH)is drug， INH-resi