云南省澜沧江流乙型脑炎与媒介、宿主和环境关系的调查研究.pdf

云南省澜沧江流域乙型脑炎与媒介、宿主 和环境关系的调查研究 研究生：李佳． 导师：周红宁教授 摘要 目的：通过云南省澜沧江流域不同地理气候环境梯度中的蚊类媒介多样性、重要 宿主动物与乙型脑炎关系的调查研究，探讨它们与发病率、重要生态因子和部分 宿主之间的相互关系。 内容： (1)澜沧江流域媒介蚊虫调查：在澜沧江流域不同环境梯度(经度、纬 度和海拔)调查采集蚊类成虫，经分类、计数、登记后，冻于液氮保存。 (2) 澜沧江流域蚊体乙型脑炎病毒自然带毒率调查：对观察点采集的部分蚊虫标本进 行研磨，上清液接种组织培养细胞以分离乙型脑炎病毒，用RT-PCR、免疫荧光 实验等方法进行病毒鉴定。 (3)澜沧江流域乙型脑炎血清学调查：在各观察点 采集健康人群血清，采用血凝抑制试验方法检测血清中乙型脑炎抗体。 方法： (1)澜沧江流域媒介蚊虫调查：在云南西部约北纬20。～28。、东经 查和抽样调查相结合的方法，选择不同经纬度(以每个纬度或经度为一水平梯 度)、海拔(以每500米海拔高度为一垂直梯度)、地理气候及植被等梯度环境内 的各类型栖境地进行蚊虫媒介物种多样性及相关生物学的调查取样。具体的调查 蚊灯逐月、定点对不同环境梯度内的人、畜房进行通宵捕捉成蚊，以此观察不同 蚊类的组成、分布等生态学习性。通过不同环境内所获的蚊虫标本、资料和数据 进行蚊虫多样性研究。 (2)澜沧江流域蚊体乙型脑炎病毒自然带毒率调查：在 蚊类调查现场，取一定数量的蚊类成虫，经分类鉴定后分装，置于液氮罐内低温 保存，带回实验室(P2或P3实验室)进行乙型脑炎病毒的检测或分离，蚊虫标 本病毒检测或分离方法主要采取消毒、研磨、离心等处理后接种C6／36细胞及 BHK21组织培养细胞分离病毒，并RT-PCR、免疫荧光实验等方法进行鉴定。所 获结果并分别计算出不同蚊种的自然带毒率。 (3)澜沧江流域乙型脑炎血清学 调查：选取澜沧江流域上游的维西县、中游的风庆县和景东县、下游的勐腊县采 集健康人血清，用血凝抑制试验检测乙型脑炎病毒抗体。 结果：(1)澜沧江流域媒介蚊虫调查：澜沧江流域居民点共捕获蚊虫86059只， 分属6属45种(亚种)。结果分析发现，北纬24。以南，随纬度的降低居民区 的蚊类物种多样性逐渐升高(r0．2379)，北纬24。以北，随纬度的升高居民区的 率调查：对4属9种39批1967只雌性成蚊进行了乙型脑炎带毒率调查，从三带 经间接免疫荧光试验为乙型脑炎病毒(JlⅣ)，同时采用乙型脑炎病毒引物对6 株JEV进行RT-PCR，结果为阳性，后经核酸序列测定分析证实为乙型脑炎病毒。 (3)澜沧江流域乙型脑炎的血清学调查：澜沧江流域的维西县、风庆县、景东 县和勐腊县共采集各县正常人血清1106份，阳性率为19．62％。 结论：(1)三带喙库蚊和中华按蚊是澜沧江地区居民点蚊类的优势种，蚊虫多样 性与调查点所处的纬度梯度和海拔梯度具有一定的联系。(2)乙型脑炎媒介复杂， 三带喙库蚊JEV带毒率高，属于当地的主要媒介。(3)该地区健康人群中普遍 存在流行性乙型脑炎病毒隐性感染，其中靠近该流域的中下游乙型脑炎病毒健康 人群血清抗体水平较高。 关键词：蚊类；澜沧江；流行性乙型脑炎；分离和鉴定；抗体 Researchontherelationbetween andits Japaneseencephalitis in andenvironmentfactors vectors，hosts LangcangRiver, Yunnan province Jia Postgraduate：LISupervisor：Prof．ZHOUHong-ning Abstract therelationbetween