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两种不同肝纤维化相关细胞因子shRNA表达载体的构建 摘 要 目的：结缔组织生长因子(CTGF)是新近发现的一种促肝纤维化的重 factor growth p，TGF-p)信 要细胞因子，是转化生长因子13(transforming 号传导途径的下游效应介质。CTGF可直接介导原代肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)活化、增殖及迁移，还能促进活化HSC的合成及分泌 细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)。金属蛋白酶组织抑制因子 进胶原分泌而在肝纤维化病情进展中发挥关键作用。所以，减少CTGF 和TIMP．1的表达，可以减轻肝纤维化程度。本研究旨在构建以大鼠CTGF 或TIMP．1基因为靶点的短发夹RNA(shortIⅢ八shRNA)表达载 hairpin 体，为进一步探索肝纤维化的基因治疗提供有力工具。方法：根据前期 1 靶点序列，退火形成双链DNA，分别克隆到经双酶切后的质粒载体 脂糖电泳和测序鉴定。结果：酶切证实以大鼠CTGF或TIMP．1基因为靶 点的表达shRNA的目的基因片段分别被成功的克隆到质粒载体 的靶基因片段完全一致。结论：成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP．1最有 效的RNA干扰靶位的shRNA表达质粒重组体，为进一步探索肝纤维化基 因治疗的新途径打下了实验基础。 关键词：RNA干扰；肝纤维化；质粒载体；结缔组织生长因子；金 属蛋白酶组织抑制因子．1 2 Constructionof recombinant vectors to shRNA—espressing targeting two differentfibrosis-related hepatic cytokines tissue Abstract：objective：Connective growthfactor(CTGF)isa discovered recently importantof cytokine promotingfibrosis。which hepatic IStransforminggrowth transduction factor-13(TGF-p)signal pathway downstream effect not factor,whichCan only mediate directly pnm哪 stellate hepatic and cell(H