vn对高糖培养huvec作用的初步探讨.pdfVIP

、『N对高糖培养下II【腻作用的初步探讨 摘要 目的 umbilicalvein endothelial 1．观察高糖培养的人脐静脉内皮细胞(human cells， 变化，以及细胞迁移能力、成管能力的变化； 2．检测VN表达水平改变对高糖培养下HUVEC中骨架结构、细胞迁移、细胞成 管能力的影响。 方法 第一部分： 建立高糖培养的HUVEC体外模型，并常规培养HUVEC作为正常对照，实验分 用WesternBlot检测两组中vN的蛋白表达情况，利用免疫荧光细胞化学染色结 合荧光显微镜观察两组中细胞微丝骨架的变化，用划痕法检测细胞迁移能力的改 变，Matrigel方法观察细胞成管情况。利用独立样本t检验对组1和组2的数 据进行分析。 第二部分： 高糖培养HUVEC，利用干扰RNA技术干扰VN的表达，实验分为组2(高糖组： 用control 培养)和组4(阳性干扰组：用VNSiRNA预干扰HUVEC，再用含葡萄糖浓度为 50mmol／L的DMEM培养液培养)。重复WesternBlot实验、免疫荧光实验、划痕 数据进行分析。 结果 第一部分： 1．Western Blot结果显示，在分组培养的0h时，组l和组2中的vN蛋白表达 …IIII I I IIIIII I I[III III 一9．710，P。。20．05)。 2．免疫荧光结果显示，在24h和48h时，组2中都伴有更加明显的细胞微丝骨 架结构的改变。 3．划痕法表明，24h时组l和组2中迁移入划痕的细胞数分别为(198．000± Pl-20．05)。 4．Matrigel法证实， 第二部分： 1．Western Blot结果显示，高糖培养oh时组2、组3、组4中的vN蛋白表达 LSD3．4=0．455，P3．4O．05)。 2．免疫荧光结果显示，24h时组2中的细胞微丝骨架结构最为明显，组3次之， 组4最不显著；48h时细胞微丝骨架分布亦然。 3．划痕实验表明，高糖培养24h时组2、组3、组4中迁移入划痕的细胞数量依 P：。4O．05；LSD。．4=38．833，P。。。0．05)。 4．Matrigel法检测，高糖培养6h时组2、组3、组4中细胞形成的血管腔数目 LSD。．。=6．000，P3。。O．05)。 结论 1．高糖可诱导HUVEC中、『N表达增高，并伴有细胞骨架重塑、细胞迁移能力增加、 细胞成管能力增强。 2．抑制vN的表达可导致高糖环境中HUVEC细胞骨架结构改变、细胞迁移能力降 低、细胞成管能力下降。 3．VN可能是糖尿病视网膜病变(diabetic 重要影响因素。 关键词： 玻连蛋白；高糖；细胞骨架；迁移；成管 onthe The ResearchRoleofVitronectin Preliminary inHUVECTrained Glucose ByHigh Abstract objective This wastoobservethe of situationof study expressionvitronectin,the andbloodvessels inHUVECtrained cytoskeletonremodeling，cellmigration forming