pfp和gzm在哮喘大鼠肺组织中的表达及rhgh的干预作用.pdf

摘要 PFP和GzmB在哮喘大鼠肺组织中的表达 及rhGH的干预作用 硕士研究生：杜文丽 导 师：邹丽萍 专 业：儿科学 郑州大学第三临床学院 河南 郑州450052 摘 要 支气管哮喘是目前严重威胁人类公共健康最常见的慢性肺部疾病之一，主 要以反复发作性的气急、胸闷、咳嗽等为主要临床症状，常在夜间和(或)清 晨发作，如果长期反复发作则可致气道重塑导致气道增厚与狭窄，最终成为阻 塞性肺气肿。目前尚未完全明确哮喘的具体发病机制，有研究表明支气管上皮 细胞的脱落和损伤参与了哮喘的病理过程，支气管上皮细胞的凋亡为哮喘发病 细胞)和自然杀伤细胞(NK细胞)分泌，是介导细胞凋亡的重要因子，其在哮 喘大鼠肺组织中的表达高低以及其对支气管上皮细胞凋亡的诱导作用目前尚不 明确。重组人生长激素(rhGH)为人工合成的一种多肽，其能够通过复杂的机 制抑制相应细胞的凋亡从而达到治疗目的。本实验通过建立大鼠哮喘模型并应 用rhGH进行干预，观察PFP与GzmB的在肺组织中的表达情况、上皮细胞凋 亡变化及其相互关系，以期为临床治疗哮喘提供相应的理论依据。 目 的 本实验通过建立哮喘大鼠模型，探讨哮喘大鼠支气管上皮细胞凋亡情况、 肺组织中PFP、GzmB的表达情况及rhGH的干预作用。 摘要 材料和方法 1 实验动物分组和哮喘模型制作 选取健康雄性4．6周龄SD大鼠30只，遵照随机原则分为J下常对照组、哮 喘模型组和rhGH干预组，每组各10只。第1，8，15天哮喘组和干预组大鼠分 别应用新鲜调配的10％卵清蛋白．氢氧化铝混悬液lml(其中卵清蛋白100rag，氢 氧化铝100rag)腹腔注射，致敏3次，对照组大鼠应用生理盐水lml进行腹腔 注射。第16d开始，分别应用l％卵清蛋白．氢氧化铝混悬液5ml给哮喘组和干预 组大鼠雾化吸入30分钟，隔日进行1次共雾化20次；干预组各大鼠在第11次 雾化吸入混悬液前30分钟给予皮下注射rhGH(1．33 KU／Kg)，共注射lO次；对 照组大鼠每次雾化吸入生理盐水5ml30分钟，隔日1次，共进行20次。 2肺组织标本制备 最后一次雾化吸入后各组大鼠分别腹腔注射苯巴比妥100rag处死，迅速解 剖取右肺置于冷冻管中并放入液氮灌中冻存，做RT-PCR用。应用无菌生理盐水 和4％甲醛溶液对左肺进行灌注和冲洗，甲醛固定后行石蜡包埋。分别于取垂直 和平行气道两个方向取材切片，作HE染色及TUNEL原位细胞凋亡检测。 3原位细胞凋亡结果分析 于光镜下分析结果：随机选取5个高倍镜野(X400并且含有同等级别支气 管)的支气管上皮总数及阳性染色上皮细胞数(着色为棕黄色)，按照公式：阳 性细胞数／细胞总数X10096以计算上皮细胞凋亡指数。 4 R卜PCR分析 BandScan 别以与两者的比值作为该大鼠的代表值。 5统计学方法 Il 摘要 应用SPSS17．0统计软件包对所得数据进行统计学分析，实验数据以i：ks表 示，多个样本均数间的比较采用单因素方差分析，组问两两比较采用LSD—t检验： 相关分析采用pearson相关行检验；以a=0．05为检验水准。 结 果 1病理学改变 正常对照组肺组织形态学无异常改变。哮喘模型组大鼠肺组织HE染色后可 见支气管管腔中有大小不一的粘液栓形成，支气管上皮细胞水肿、脱落、结构 不规则；杯状细胞增多，黏膜下层及平滑肌增厚；气道壁及肺间质有大量的炎 性细胞浸润，以嗜酸性粒细胞及淋巴细胞为主；rhGH干预组炎症反应较哮喘组 轻，杯状细胞